Etude des relations entre la structure et les fonctions du facteur willebrand par des methodes de biologie moleculaire

par Anne-Sophie Ribba

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JACQUES CHEN.

Soutenue en 1992

à Paris 7 .

mots clés

Résumé

Le facteur willebrand (vwf) est une glycoproteine multimerique intervenant dans l'adhesion des plaquettes au sous-endothelium lese. Il se lie a des composants du sous-endothelium et a deux recepteurs plaquettaires: les glycoproteines ib (gpib) et iib/iiia (gpiib/iiia). Le vwf est la proteine porteuse du facteur viii (fviii). Un defaut quantitatif et/ou qualitatif du vwf est a l'origine de la maladie de willebrand (vwd). La premiere partie du memoire decrit la localisation de l'epitope de l'anticorps monoclonal (acm) 418 inhibant la liaison du vwf au fviii (acides amines (aa) 1 a 106), et celui de l'acm 9 inhibant la liaison du vwf a la gpiib/iiia (aa 1698 a 1773). Dans la deuxieme partie, nous avons identifie des anomalies moleculaires dans le gene du vwf chez des variants de vwd caracterises par une reactivite augmentee (type iib) ou diminuee (type iia) du vwf pour la gpib. Dans le type iib, nous avons detecte une duplication d'une met au niveau des aa 540-541 et deux mutations ponctuelles, arg 543trp et val 553met, dans une boucle juxtaposant les trois domaines de liaison du vwf a la gpib. Dans le type iia, cinq mutations ponctuelles ont ete identifiees: arg 834gln, ile 865thr, glu 875lys et pro 885ser dans une region sensible a la proteolyse, et cys 509arg detruisant le pont disulfure etabli entre les cys 509 et 695. Deux des mutations, duplication met 540-541 et glu 875lys, ont ete inserees sur l'adnc du vwf et exprimees dans des cellules cos. L'etude fonctionnelle des deux vwfr mutes a montre que la mutation glu 875lys ne diminue pas in vitro l'affinite du vwf pour la gpib. En revanche, la duplication de la met 540-541 augmente la reactivite du vwf pour la gpib et est responsable du phenotype iib du patient

Titre traduit

Study of relationship between structure and functions of von willebrand factor by methods of molecular biology

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