Determination de la structure primaire de la lactoperoxydase bovine. Etude genetique de l'enzyme et localisation cellulaire de sa secretion

par MARIE-MADELEINE CALS

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Labbe.

Soutenue en 1992

à Paris 7 .

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Résumé

Apres avoir isole la fraction active majoritaire de la lactoperoxydase (lp) bovine, nous avons etabli sa structure primaire. Cette proteine, a laquelle est lie un heme et des chaines glycaniques (10% de la proteine en masse), est formee d'une chaine polypeptidique unique de 612 residus, de masse moleculaire voisine de 70 kda. La lp est similaire a trois peroxydases humaines (thyroide peroxydase, myeloperoxydase, eosinophile peroxydase) et a une partie de la prostaglandine h synthase. La presence, dans la lp, d'un nombre impair de cys renforce l'hypothese selon laquelle l'heme serait lie a la proteine par l'intermediaire d'un pont disulfure, l'absence de thiol libre dans l'enzyme ayant ete prouvee anterieurement. De plus, la localisation preliminaire des ponts disulfure met en evidence la presence de 7 ponts intrachaine. Nous n'avons cependant pu mettre en evidence une cys liee a l'heme. Parallelement, et a partir d'elements de sequence dont nous disposions a l'epoque, nous avons obtenu, par la technique de polymerase chain reaction (pcr), une sonde adnc specifique du gene codant la lp caprine. Des etudes d'hybridation croisee ont ete effectuees, a partir d'hybrides somatiques hamster-ovin et hamster-bovin. Un nouveau groupe de syntenie a ete defini chez les ovins (u20), auquel appartient le gene de la lp. Nous envisageons ulterieurement de preciser la localisation chromosomique de ce gene dans les especes bovine, caprine, ovine et humaine. Enfin, grace aux techniques d'hybridation in situ et d'immunohistofluorescence sur des coupes histologiques de tissu mammaire caprin, nous avons mis en evidence la presence de la lp et de ses arnm dans les cellules acineuses de la glande mammaire

Titre traduit

Determination of the primary structure of bovine lactoperoxidase. Molecular study of the enzyme and cellular localization of its secretion

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