Contribution a l'etude de la nitrate reductase des plantes superieures et a sa regulation : utilisation de systemes heterologues

par Hoai-Nam Truong

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de FRANCOISE DANIEL-VEDELE.

Soutenue en 1992

à Paris 6 .

mots clés

Résumé

La nitrate reductase (nr) des plantes superieures catalyse la premiere etape d'assimilation du nitrate, en le reduisant en nitrite. Nous avons etudie la nr des plantes superieures ainsi que sa regulation a l'aide de systemes heterologues. L'expression de l'adnc du gene nia2 codant pour l'apoenzyme de tabac, dans s. Cerevisiae, donne lieu a une proteine dimerique de taille correcte. Les donnees biochimiques montrent que deux des trois domaines de la nr sont fonctionnels (les domaines a fad et a heme). Le troisieme domaine, celui du cofacteur a molybdene (moco) est inactif du fait de l'absence de ce cofacteur dans la levure. La presence d'une forme dimerique de la nr en absence de moco, remet en question le role presume indispensable du moco dans la dimerisation de la nr. Nous avons utilise la technique de gels de retardement avec la proteine regulatrice nit2 de n. Crassa, et defini ainsi des regions du promoteur (pnr) du gene de la nr potentiellement impliquees dans la regulation par la glutamine. La complementation d'un mutant de s. Cerevisiae affecte dans la regulation du metabolisme azote, nous a permis d'isoler deux adnc d'a. Thaliana, dont la caracterisation est en cours. Enfin nous avons montre qu'il etait possible de mettre au point dans s. Pombe un systeme pour tester des facteurs putatifs de regulation de la nr, pour leur propriete d'activer l'expression d'un gene rapporteur sous controle du pnr

Titre traduit

Contribution to the study of higher plant nitrate reductase and its regulation; by the use of heterologous systems

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