Développement de la conductance-métrie pour des contrôles microbiologiques dans une industrie pharmaceutique : études des facteurs de réponse d'une Entérobactérie, applications en mesure directe et indirecte

par François Lamotte

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Charles Diviès.

Soutenue en 1992

à Dijon .

mots clés

• Métabolites
• Microbiologie pharmaceutique
• Industrie pharmaceutique -- Qualité -- Contrôle

Résumé

Le travail aborde dans un premier temps la compréhension des mécanismes ioniques qui concourent à l'élaboration d'une réponse conductance-métrique lors de la croissance d'E. Coli. Le développement d'applications de cette technique est ensuite décrit pour des contrôles microbiologiques d'une industrie pharmaceutique. La conductance (sens et amplitude) des milieux est fonction de la nature des substrats carbones et des tampons. En tampon phosphate, la conductance varie négativement en fonction du temps, alors qu'elle évolue positivement en tampon MOPS. En presence d'acide gluconique, l'amplitude de la variation est maximale en tampon MOPS ; en tampon phosphate aucune variation n'est observée. L'analyse chimique des milieux de culture démontre que la conductance résulte de phénomènes ioniques complexes dépendant de la croissance, du métabolisme bactérien et de la composition chimique des milieux. Ces relations d'interdépendance sont confirmées par trois observations : - les cinétiques de croissance et de conductance apres addition d'antibiotiques sont modifiées de facon analogue - les CMI de 9 antibiotiques déterminées par les méthodes reconnues et conductance-métrique sont similaires - l'analyse des cinétiques de conductance classe les antibiotiques selon leur type d'action. Cette technique permet également l'appréciation des valeurs nutritives des peptones et des milieux de référence ainsi que le contrôle de l'efficacité d'agents de conservation sur P. Aeruginosa, S. Aureus, E. Coli et A. Niger. Pour dénombrer A. Niger nous avons développé un milieu de culture. La présence de micro-organismes aérobies est evaluée par mesure conductance-métrique indirecte du CO2 excrété après optimisation de la composition du milieu et de la surface d'échange gazeuse. Le criblage de 23 souches aérobies, l'utilisation de membranes filtrantes afin de concentrer les micro-organismes et le retraitement des données confirment la validité de la technique pour l'analyse de produits pauci-microbiens.

Titre traduit

Development of conductance microbiology in a pharmaceutical industry : studies of response's factors from an enterobacteriaceae, application with direct and indirect measurements

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