De nouvelles applications des surfactants non ioniques à la purification des protéines : préparation de colorants immobilisés mécaniquement résistants : exploration d'un nouveau concept de partition d'affinité avec partition de phases thermo induite : préparation de supports chromatographiques mécaniquement résistants pour la chromatographie d'interactions hydrophobes

par Youne Lie Kong Sing

Thèse de doctorat en Génie Enzymatique, Bioconversion et Microbiologie

Sous la direction de Olivier Bertrand.

Soutenue en 1992

à Compiègne , dans le cadre de École doctorale 71, Sciences pour l'ingénieur (Compiègne) .

mots clés

• Clhp
• Hic
• Surfactants
• Colorants
• Protéines -- Purification
• Chromatographie d'affinité
• Affinité chimique

Résumé

Si l'on greffe à l'extrémité hydrophile d'un surfactant de type polyoxyéthylène éther un colorant réactif, il est possible de percoler ce surfactant modifié sur une colonne de phase inverse. La partie hydrophobe du surfactant modifié fait qu'il est retenu sur le support, la partie hydrophile agit comme un spacer et présente au solvant le colorant. La colonne ainsi traitée n'a plus guère ou n'a plus du tout, de caractère de phase inverse et peut être utilisée comme le serait une colonne de colorant immobilisé sur agarose. Cette technique a permis la préparation de supports de colorants immobilisés mécaniquement résistants. Des applications à la purification de ribonucléase et de chymotrysinogène et aussi à la purification à l'échelle préparative du Pop Corn Inhibiteur sont présentées. On peut utiliser le même surfactant mais non modifié percolé sur une colonne de phase inverse. Les propriétés de la colonne sont radicalement changées, sa surface rappelle celle d'une colonne greffée avec du polyéthylène glycol et elle peut être utilisée pour la chromatographie d'interactions hydrophobes de protéines en haute performance. A basse force ionique les protéines ne sont pas retenues, à haute force ionique les protéines sont retenues et peuvent être désorbées par un gradient décroissant de force ionique. Une application de ce type de colonne dans la purification d'un aspartyl protéase de Rhizopus est présentée. Finalement un nouveau concept de partition d'affinité faisant usage de la partition de phase thermo-induite de Triton X114 a aussi été exploré. Un colorant a été greffé sur le Triton X114 ou sur un surfactant de type polyoxyéthylène éther. Ceci n'a pas permis comme cela avait été espéré d'entraîner la protéine cible de ce ligand d'affinité vers la phase surfactant.

Titre traduit

Novel applications of non ionic surfactants to protein purification : preparation of mechanically resistant efficient immobilized dyes for protein purification : exploratory study of a new concept of affinity partitioning by a temperature-induced phase separation : preparation of mechanically resistant supports for hydrophobic interaction chromatography

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