Developpement d'outils et investigations genetiques chez clostridium acetobutylicum

par HOUSSINE AZEDDOUG

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Madeleine Sebald.

Soutenue en 1991

à Paris 7 .

mots clés

Résumé

Trois vecteurs navettes ont ete construits en utilisant pim13 comme replicon gram positif associe aux plasmides puc19 ou pbr322. Ces plasmides se repliquent a la fois chez c. Acetobutylicum, b. Subtilis et e. Coli. L'etude de leur stabilite a montre une segregation importante dans la souche ni-4081 de c. Acetobutylicum. Cet obstacle a pu etre leve en selectionnant une souche (ni-4082) chez laquelle ces plasmides recombinants sont maintenus de maniere stable. Deux systemes de restriction-modification de type ii ont ete mis en evidence et caracterises dans deux souches differents de c. Acetobutylicum. Il s'agit d'une part de l'enzyme de restriction gaci isole de la souche ni-4081 qui est un isol-schizomer et mboi. Le systeme de modification correspondant qui consiste en la methylation de l'adenine presente dans la sequence, est identique a l'action de la dam-methylase d'e. Coli. Le deuxieme enzyme de restriction cacii a ete identifie dans la souche abkn8. Elle reconnait et hydrolyse la sequence hexanucleotidique 5-gcnngc-3 en generant des bouts francs. Deux plasmides recombinants identiques (pcer100 et pcer101) obtenus independamment a partir d'une banque genomique de c. Acetobutylicum abkn8, se sont reveles capables de restaurer, chez les souches reca# d'e. Coli, la resistance au mms, a la mc et aux rayons uv. La sequence nucleotidique de l'insert pcer100 a revele la presence de 3 phases de lecture ouvertes codant pour 3 proteines de poids moleculaires de 16, 21 et 23 kda. Les deux proteines (16 et 21 kda) presentent une forte homologie avec les produits des genes de resistance au tellurium identifies chez alcaligenes sp. . La proteine de 23 kda, qui ne presente aucune homologie avec les differentes proteines reca connues et sequencees a ce jour, est vraisemblablement responsable de la complementation partielle des mutations reca d'e. Coli

Titre traduit

Development of tools and genetic investigations of clostridium acetobutylicum

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