Thèse soutenue

Biosynthèse et propriétés enzymatiques et pharmacologiques de l'enzyme de conversion de l'angiotensine I. Mise en évidence de deux domaines fonctionnels par mutagenèse dirigée
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Auteur / Autrice : Lei Wei
Direction : Éric Clauser
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1991
Etablissement(s) : Paris 6
Jury : Président / Présidente : Philippe Ascher
Rapporteurs / Rapporteuses : Bernard Roques, Jean-Pierre Gorvel

Résumé

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L'enzyme de conversion (eca) (ec 3. 4. 15. 1) est une métallo-dipeptidyl carboxypeptidase a zinc qui joue un rôle important dans la régulation de la pression artérielle. Elle active l'angiotensine I en angiotensine II, un puissant vasoconstricteur, et inactive aussi la bradykinine, un puissant vasodilatateur. En 1988, l’ADNc de l'eca endothéliale humaine a été cloné dans notre laboratoire, conduisant à la découverte inattendue de l'organisation de la molécule en deux domaines homologues portant chacun un site actif potentiel. Nous avons étudié la fonction des différents domaines de l'eca a l'aide d'un système d'expression dans les cellules d'ovaires d'hamster chinois (cho) et des techniques de mutagenèse dirigée. Nous avons montre que l'eca contient en fait deux sites actifs indépendants: chaque site étant capable de convertir l'angiotensine I en angiotensine II. En plus, pour chaque site, l'atome de zinc joue un rôle catalytique essentiel. Et enfin, chaque site est active par l'ion chlorure et inhibe par les inhibiteurs compétitifs de l'eca. Les deux sites se différencient par leur activité catalytique et par leur sensibilité à l'ion chlorure. Nous avons aussi montre que l'eca est attachée à la membrane par le segment peptidique hydrophobe proche de son extrémité c-terminale. Dans les cellules cho, l'eca membranaire peut subir une modification protéolytique post-traductionnelle dans la région c-terminale pour produire une enzyme soluble. Ce mécanisme de sécrétion pourrait être extrapolé aux cellules endothéliales qui sont considérées être a l'origine de l'eca plasmatique qui a aussi une extrémité c-terminale tronquée.