Développement de la génétique moléculaire pour la production de protéines hétérologues chez le champignon Tolypocladium geodes

par Thierry Calmels

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Gérard Tiraby.

Soutenue en 1990

à Toulouse 3 .

mots clés

• Champignons
• Technologie des protéines
• Plantes -- Génétique moléculaire

Résumé

Dans un premier temps, un protocole de transformation a ete realise chez tolypocladium geodes en utilisant un adn plasmidique portant comme marqueur dominant, le gene sh ble conferant la resistance a la phleomycine. L'adn etranger a ete introduit avec une frequence elevee dans des spores traitees de facon menagee avec une enzyme lytique de telle sorte que leur resistance a la pression osmotique et leur capacite de germination ne soient pas alterees (chapitre i). Un systeme pour la selection de sequences a activite promotrice permettant l'expression du gene de selection sh ble a ete mis au point. Le plasmide put737 possedant un promoteur tres fort appele tr1 a ete ainsi isole et permet apres transformation d'obtenir des colonies resistantes a la phleomycine non seulement chez t. Geodes mais aussi chez t. Reesei (chapitre ii). L'etude de l'aptitude a faire excreter des proteines recombinantes par t. Geodes fait l'objet de la derniere partie de ce travail. A partir d'une compilation de proteines excretees et cytoplasmiques, une comparaison de la distribution des dipeptides a permis de montrer que certains doublets dibasiques specifiques d'endopeptidases sont peu representes parmi les proteines secretees. Ce travail a permis de mettre en evidence une endoprotease specifique du doublet lys-arg chez t. Geodes. (chapitre iii). L'excretion de 3 proteines modeles a ete etudiee chez t. Geodes: la serum albumine humaine, la pullulanase de klebsiella pneumoniae et l'angiogenine humaine (chapitre iv)

Titre traduit

Development of molecular genetics for the production of heterologous proteins by the fungus, tolypocladium geodes

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