Etude des proteolipides au cours du developpement du cerveau de bovin. Utilisation de la spectrometrie de masse pour la caracterisation des proteines

par PATRICK SCHINDLER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées

Sous la direction de LUU BANG.

Soutenue en 1990

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008) .

mots clés

• Protamines

Résumé

Nous avons etabli, au cours de cette etude sur les proteolipides du cerveau de bovin, que la distribution des proteolipides est homogene quel que soit la region (hemispheres cerebraux, bulbe rachidien, et cervelet) du cerveau de bovin adulte. Nous avons egalement etabli que le dm-20 apparait pratiquement en meme temps que la substance blanche au cours du developpement du cerveau de bovin, tandis que le plp n'est detecte qu'environ 4 semaines plus tard. Les differences entre le dm-20 et le plp (moment d'apparition, structure, comportement lors de reconstitutions membranaires) argumentent en faveur d'une fonction propre au dm-20 par rapport au plp dans la myeline. Nous avons aussi montre que des proteolipides mineurs existent au cote des proteolipides majeurs dm-20 et plp et que leur expression est fonction de l'age du bovin. Au cours de cette etude, nous avons ete confronte a un probleme de caracterisation des proteolipides. Afin de le resoudre, nous nous sommes interesses a la spectrometrie de masse. Les proteolipides ne faisant pas partie de son domaine d'application habituel, nous avons cherche a etendre celui-ci a des proteines particulieres, comme les proteolipides isoles du cur et du cerveau de bovin qui se caracterisent par leur grande hydrophobie, et comme les protamines isolees du sperme de seiche et d'etalon qui se caracterisent par leur richesse en residus basiques. Nous avons determine les conditions operatoires qui permettent de mesurer par differentes techniques de spectrometrie de masse (fast atom bombardment, #2#5#2cf plasma desorption time of flight, et electrospray), la masse moleculaire exacte des protamines, et celle des proteolipides isoles du cur de bovin (<10 kda). Nous avons egalement demontre la necessite d'utiliser la spectrometrie de masse en combinaison avec la degradation d'edman et l'analyse d'acides amines pour etablir la structure primaire des protamines et

Titre traduit

Developmental study of proteolipids in bovine brain. Use of mass spectrometry for the characterization of proteins

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