Recherche Avancée

Thèse soutenue

5-aminolevulinate deshydratase : clonage et expression du gène de rhodobacter sphaeroïdes

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Auteur / Autrice : Anne-Marie Delaunay
Direction : Pierre Alain Balangé
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1990
Etablissement(s) : Rouen

Résumé

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La construction d'une banque génomique de rhodobacter sphaeroïdes dans une souche d'escherichia coli (SHSP3) hem b#), mutée sur le gène codant pour la 5-aminolevulinate deshydratase (5-ALAD, E. C. 4. 2. 1. 24) a été réalisée. La 5-ALAD est une enzyme oligomérique synthétisant à partir de 5-ALA le porphobilinogène, monopyrrole précurseur des hemes. La banque obtenue après transformation de la souche SHSP3 présente des colonies de phénotypes différents. Certaines sont caractérisées par une croissance rapide. Nous avons sélectionné parmi ces colonies, 2 clones présentant une activité 5-ALAD, accompagnée de la production d'une protéine reconnue par des anticorps specifiques apres immunoempreinte. L'analyse de ces plasmides recombines indique que l'adn a été remanié au cours de la transformation. Toutefois l'un des plasmides conserve après purification et retransformation de la souche SHSP3, la possibilité de complémenter la délétion; ce plasmide possède au moins une partie de l'adn introduit, en particulier le gène codant pour la 5-ALAD. Le sous-clonage a été effectué dans le plasmide PUC19. La séquence codante pour la 5-ALAD est sous le contrôle du promoteur du vecteur d'expression