Mecanismes d'incorporation de proteines membranaires dans des liposomes lors de reconstitutions utilisant des detergents : application a la calcium atpase du reticulum sarcoplasmique

par Daniel Lévy

Thèse de doctorat en Biophysique moléculaire

Sous la direction de Paul Vigny.

Soutenue en 1990

à Paris 6 .

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Résumé

Dans le but d'obtenir des informations concernant l'association lipide/proteine lors de protocoles de reconstitutions au moyen de detergent, un protocole de reconstitution est propose. Applique a la caatpase du reticulum sarcoplasmique, les mecanismes de reconstitution sont montres associes au detergent utilise. Les proteoliposomes ont ete caracterises selon l'activite biologique, l'incorporation et l'orientation de la proteine. L'etat d'aggregation de la proteine s'est egalement revele etre un facteur determinant dans la reconstitution. De plus l'efficacite du transport est la meilleure obtenue jusqu'a present. L'utilisation des bio-beads pour eliminer le detergent permet d'obtenir quelque soit les conditions experimentales des vesicules unilamellaires homogenes en tailles et impermeantes. La faible permeabilite de base aux protons a permis de mettre en evidence et d'etudier le contre transport de protons par cette proteine lors du transport de calcium

Titre traduit

Mechanisms of membrane protein insertion into liposomes during reconstitution procedures involving the use of detergents. Application of the case of the sarcoplasmic reticulum calcium atpase

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