Mise en évidence et caractérisation biologique de deux toxines colibacillaires à activité cytotoxique et nécrosante (CNF1 et CNF2) et identification immunochimique de CNF1

par Jean de Rycke

Thèse de doctorat en Sciences. Microbiologie

Sous la direction de Jean Oudar.

Soutenue en 1990

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Jean Oudar.

mots clés

• Escherichia coli
• Toxines
• ELISA
• Pathogénicité

Résumé

L'etude des proprietes cytotoxiques de souches d'e. Coli isolees de diarrhees du veau a permis de mettre en evidence deux types originaux de toxines dont la caracteristique commune est de produire un effet de multinucleation sur les cellules de lignee en culture. Les modalites de l'effet cytopathique et les epreuves de seroneutralisation ont montre que l'un des types de cytotoxicite est identique a celui exerce par la toxine cnf (pour cytotoxic necrotizing factor) decrite anterieurement dans les souches d'e. Coli provenant de diarrhees de l'enfant. Nous avons denomme ce type cnf1 pour le distinguer de l'autre, appele cnf2. La toxine cnf1 a ensuite ete identifiee apres electrophorese en gel de polyacrylamide en presence de sodium dedecyl sulfate et par trois approches complementaires: purification, immunoempreinte a l'aide d'un antiserum neutralisant specifique, comparaison des profils de souches produisant ou non la toxine. Il s'agit d'une proteine de 115 kda, associee a la fois a la cytotoxicite et a la toxicite in vivo. Un test elisa de detection de cnf1 dans les extraits bacteriens bruts a ete mis au point (methode double-sandwich). Enfin l'effet toxique en letal de cnf1 a ete confirme chez l'agneau nouveau-ne inocule par voie intraveineuse. L'ensemble de ces travaux montrent que, outre l'interet fondamental qu'elles peuvent presenter dans l'etude du fonctionnement de la cellule eucaryote, les toxines cnf constituent des facteurs de pathogenicite potentiels dont la contribution exacte dans la virulence des souches productrices d'e. Coli devra etre evaluee

Titre traduit

Detection and characterization of two escherichia coli toxins with cytotoxic and necrotizing activity (cnf1 and cnf2) and immunochemical identification of cnf1

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