Rôle de glycoprotéines membranaires (intégrines et sélectines) dans les interactions plaquettaires et cellulaires : investigation structurale et fonctionnelle

par Sophie Parmentier

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de John McGregor.

Soutenue en 1990

à Lyon 1 .

Le jury était composé de John McGregor.

mots clés

• Sélectines
• Intégrines
• Plaquettes sanguines
• Anticorps monoclonaux
• Agrégation plaquettaire

Résumé

De nombreuses glycoproteines (gps) sont presentes a la surface des plaquettes sanguines humaines. Cependant, la structure et les fonctions de cerrtaines gps sont pratiquement inconnues. Des techniques de chromatographie rapide en milieu liquide (fplc), couplees a la technologie des hybridomes ont permis de mettre au point de nouveaux anticorps monoclonaux, dont deux ont ete selectionnes pour leurs effets fonctionnels: lyp20 est dirige contre un epitope pont disulfure-dependant de la gmp-140, et se fixe specifiquement sur les plaquettes stimulees par la thrombine (122001184 sites par plaquette). Lyp20 inhibe significativement l'agregation et la secretion des plaquettes stimulees par le collagene ou la thrombine. De plus, lyp20 inhibe l'adhesion des plaquettes stimulees aux cellules u937. Ces resultats suggerent que la gmp-140 joue un role important dans l'agregation plaquettaire et dans l'interaction des plaquettes avec d'autres cellules sanguines. Les vlas sont des gps qui participent a l'adhesion des plaquettes a la matrice extracellulaire. Ils appartiennent a la famille des integrines, et forment des complexes heterodimeriques avec des sous-unites alpha variables et une sous-unite beta commune, la gpiia, dont les fonctions sont inconnues. Lyp22, dans des conditions non-denaturantes, entraine toutes les sous-unites associees a la gpiia des western blots prouvent que le site de fixation de lyp22, situe sur la gpiia, est pont disulfure-dependant. La stimulation des plaquettes n'augmente pas significativement le nombre de sites de fixation de lyp22 (7708928 par plaquette). Lyp22 est le premier anticorps anti-gpiia capable d'inhiber l'agregation des plaquettes au repos au collagene. Ces resultatss demontrent que la gpiia participe activement au role joue par le complexe gpia-iia dans l'agregation et l'adhesion des plaquettes au collagene. Au cours de la cascade d'evenements aboutissant a l'adhesion des plaquettes au sous-endothelium, et a l'agregation consecutive des plaquettes, la gpiia, comme la gpiiib, participe au processus initial d'adhesion des plaquettes au sous-endothelium, et a l'agregation consecutive des plaquettes, la gpiia, comme la gpiiib, participe au processus initial d'adhesion des plaquettes au collagene, alors que la gmp-140 intervient dans la stabilisation de l'agregation des plaquettes ou de leur interaction avec d'autres cellules sanguines. L'elucidation du role de ces gps doit contribuer a une meilleur maitrise de la formation du thrombus dans les malades cardio-vasculaires

Titre traduit

Structure and functions of membrane glycoproteins (integrins and selectins) in platelet-platelet and platelet-cell interactions

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