Etude des stades précoces de développement embryonnaire : coculture in vitro dans l'oviducte et sur mono couches de cellules épithéliales tubaires
par Jamal Hamidi
Thèse de doctorat en Analyse et modélisation des systèmes biologiques
Sous la direction de Yves Ménézo.
Soutenue en 1990
à Lyon, INSA , en partenariat avec LBA – Laboratoire de Biologie Appliquée (Lyon, Rhône) (laboratoire) .
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Résumé
Chez de nombreuses espèces de mammifères, les embryons résultant d'une fécondation in vitro ou manipulés aux stades précoces de développement, se bloquent ou voient leur viabilité sévèrement altérée. Deux hypothèses sont relatées dans la littérature concernant l'origine du blocage embryonnaire : l'une privilégiant les facteurs cytoplasmiques maternels, l'autre faisant intervenir de manière équivalente le cytoplasme et le noyau. Nos résultats, obtenus avec les expériences de rétro-croisements, plaident plutôt en faveur d'une hypothèse cytoplasmique. Dans l'étude des relations oviducte-embryon, les résultats sont souvent contradictoires, notamment pour l'hormona-dépendance. La coculture d'embryons dans l'oviducte impubère in vitro sans traitement hormonal et sans sérum, nous a permis d'affirmer la non hormona-dépendance des facteurs embryo-trophiques et l'aptitude de l'oviducte impubère à assurer le développement embryonnaire précoce. D'autre part, nous avons montré que les sécrétions tubaires in vivo comme in vitro, ne sont pas embryo-dépendants : la présence d'embryons n'induit pas d'augmentation d'AMP cyclique ni d'influx d'acides aminés libres dans l'oviducte. La coculture d'embryons sur des monocouches de cellules épithéliales tubaires, comme dans le cas de coculture dans l'oviducte in vitro, a permis des taux importants de déblocage embryonnaire avec maintien de la chronologie, de la morphologie et de la viabilité embryonnaire. Ces performances ne semblent ni spéci-spécifiques ni strictement tissu-spécifiques.
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Titre traduit
= tudy of early embryo development : in vitro co-culture into the oviduct and on epithelial tubular cell monolayers
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Résumé
[Embryos of many species of mammals do not lead to normal cleavage and development, with lost of viability, when they are manipulated in vitro out of their natural site. Two hypothesis are described in literature about the origin of this "Cell-block" : One is related to maternal cytoplasmic factors, the second one equally involves cytoplasm and nucleus. Our results, obtained with back-cross experiments, are in agreement with cytoplasmic hypothesis. In the study of oviduct-embryo relationships and of "embryo-trophic factors" implication, results are always contradictory, especially for hormone dependence (WHITTINGHAM, 1968 ; MINAMI et al. , 1988). Using the technique of coculture in prepubertal oviduct, without any serum addition or hormonal treatment, we can now assert the non hormone dependence of embryotrophic factors and the aptitude of prepubertal oviduct to sustain the early embryo development (HAMIDI et al. , 1988 ; MENEZO et al. , 1989). Moreover, we have demonstrated that the tubular secretions are not embryo dependent: embryo don't induce increased cAMP level nor amino acids influx in the oviduct. Furthermore, using a substitute of serum, Ultroser G, we obtained for the first time a confluent monolayers of epithelial cells derived from mouse oviduct. Embryo coculture on those monolayers allowed an important level of embryo development with maintenance of chronology, morphology and viability. This performance does not seem specie-specific nor strictly tissue-specific. About the metabolism of glucoside, the modification of culture medium by epithelial cells (monolayers), is in agreement with the observation of CHA TOT et al. (1989) ; however, this result is not confirmed by the use of other cell supports. ]
