Purification, characterization of bovine neutrophil pkc and demonstration of a potential substrate behaving as a small sized g protein

• Auteur / Autrice : Marie-José Stasia
• Direction : Pierre Vignais
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Grenoble 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Neutrophiles

Mots clés libres

Biochimie analytique, structurale et metabolique

Neutrophile bovin

Phagocytose

Pkc

Acyl-coa

Isoforme

Proteine de 23 kda

Proteine g

Calcium

Résumé

Les neutrophiles de mammiferes contiennent une quantite de proteine kinase c (pkc) relativement importante. Les esters du phorbol (pma), dont la cible cellulaire est la pkc, induisent la phosphorylation de certaines proteines, une production massive d'ions superoxydes et l'exocytose de granules lysosomiaux dans le neutrophile. La pkc de neutrophiles bovins a ete purifiee a l'homogeneite a partir de cytosol, en trois etapes: chromatographies sur colonne echangeuse d'anions de52 cellulose, monoq et sur colonne d'affinite hydrophobe phenyl sepharose. D'apres son profil d'elution sur colonne d'htp, la pkc de neutrophiles bovins se comporte comme une isoforme de pkc de cerveau, codee par le gene gamma. Par immunotypage, la pkc de neutrophiles bovins contient les isoformes de type beta et zeta. Les acyl-coa a longue chaine mis en incubation avec la pkc, sont d'excellents inhibiteurs de cette enzyme. Ajoutes directement dans le milieu de dosage, ils activent la pkc. L'effet inhibiteur des acyl-coa est reserve par l'atp-mg. La pkc de neutrophiles bovins phosphoryle preferentiellement une proteine de 23 kda, localisee dans le cytosol de ces cellules. Cette proteine a ete purifee a homogeneite a partir de cytosol de neutrophiles bovins. Durant les premieres etapes de sa purification, la proteine de 23 kda est co-eluee avec la pkc et une proteine de 7 kda. Les proteines de 23 kda et de 7 kda fixent le ca#2#+. Seule la proteine de 23 kda fixe le gtpgammas. Le cytosol de neutrophiles bovins contient, en plus de la proteine de 23 kda fixant le gtpgammas, des proteines g appartenant vraisemblablement au groupe des proteines ras ou apparentees, de masse moleculaire egale a 24 kda et adp-ribosylees par l'exoenzyme c3 de la toxine botulinique. Par isoelectrofocalisation, ces proteines sont resolues en trois groupes principaux de phi 5,5-5,6 (comme la proteine rho c recombinante humaine), 5,8-6,1 et 6,3-6,5. Ce dernier