Production et caractérisation d'anticorps monoclonaux bispécifiques obtenus par fusion d'hybridomes

par Valérie Lebègue

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Alberto Roseto.

Soutenue en 1990

à Compiègne .

mots clés

• Double isotypie
• Hybrides d'hybridomes
• Hybridomes
• Anticorps bispécifiques
• Anticorps monoclonaux
• Isotypes des immunoglobulines

Résumé

Deux souches d'hybrides d'hybridomes, l'une E13 sécrétant une IgG1 anti-Cytomegalovirus, l'autre 70B12 sécrétant une IgG3 anti-Chlamydia trachomatis, ont été fusionnées pour obtenir des anticorps monoclonaux bispécifiques murins et démontrer la réassociation hétérologue "in vivo" des chaînes lourdes gamma 1 et gamma 3. Après fusion, nous avons obtenu des clones de "quadromes" avec un rendement de 27%. 77 % de leur surnageant présentent des immunoglobulines à la fois positives sur cellules MRC5 infectées par Cytomegalovirus et sur cellules Hela infectées par Chlamydia trachomatis. Mais cette double spécificité ne prouve pas l'existence d'anticorps hybrides car l'hybride d'hybridomes peut produire simultanément l'anticorps bispécifique et les deux anticorps monospécifiques parentaux. Parmi les sept clones choisis au hasard, six présentent dans leur surnageant des immunoglobulines hybrides IgG1/IgG3. Après immunopurification de deux ascites différentes, 10 % d'anticorps hybrides ont été mis en évidence. Ce ne sont pas des hétéroaggrégats formés à partir de deux immunoglobulines parentales. Ces anticorps présentent les quatre types de chaînes lourdes et légères, et des paires homologues de chaînes lourdes et légères de chaque type sont capables de se réassocier pour donner les deux activités immunologiques.

Titre traduit

Design and development of an experimental network dedicated to the transfer of medical images

Résumé

A fusion technique between E13 hybridomas secreting an anti-Cytomegalovirus (IgG1) and 70B12 hybridomas secreting an anti-Chlamydia trachomatis (IgG3) was set up to obtain murin bispecific monoclonal antibodies and to demonstrate the possible "in vivo" association between gamma 1 and gamma 3 heavy chains. After fusion, 27 % of seeded wells showed hybridomas growth and 77% of their supernatants were reactive with both Cytomegalovirus infected cells and Chlamydia trachomatis infected cells. But, this double specificity is not sufficient to prove the existence of a hybrid antibody molecule : hybrid hybridoma can produce simultaneously the bispecific antibody and the parental monospecific antibodies. Among seven clones random selected, six surpernatants of them showed IgG1/IgG3 hybrid immunoglobulins and 10% hybrid antibodies were revealed in immunopurified ascites of two hybrid hybridomas ascites. We showed that they were not heteroaggregats made up of two parental immunoglobulins. These antibodies exhibited four types of heavy and light chains ; and heavy chain of each type might associate with light chain of homologue type to give two immunological activities.