Etude de la transition conformationnelle en fonction du pH de la phosphoglycérate kinase de levure

par Sophie Gaillard

Thèse de doctorat en Sciences biologiques. Biochimie

Sous la direction de Jeannine Yon-Kahn.

Soutenue en 1989

à Paris 11 .

mots clés

• Phosphoglycérate kinase
• Transition conformationnelle
• Pont salin
• Tests d'activité
• Protéines kinases
• pH
• Fluorescence
• Dichroïsme circulaire

Résumé

Le travail présenté dans ce mémoire a pour sujet l'étude de l'influence du pH sur la conformation de la phosphoglycérate kinase de levure. Cette étude a été entreprise dans le but de déceler la présence d'un pont salin, supposé jouer un rôle dans le mouvement charnière des deux domaines de la protéine, et dont l'existence a été proposée à partir de données cristallographiques. Ce travail a permis par ailleurs d'étudier le repliement de la protéine induit par le pH. Trois signaux ont été utilisés pour suivre les changements conformationnels de la phosphoglycérate kinase induits par le pH : la fluorescence des tryptophanes, le dichroïsme circulaire dans l'UV lointain et l'activité enzymatique. Ces trois signaux ont permis de mettre en évidence l'existence d'une dénaturation réversible de la protéine entre pH 5 et pH 4. Il est montré que cette transition ne peut être simplement due à la rupture d'un pont salin. La protéine à pH 4 possède des caractéristiques voisines de celles d'un intermédiaire du repliement observé lors d'études de dénaturation­ renaturation induites par le chlorure de guanidine. Les études cinétiques de la transition acide ont permis de comparer les processus de déturation induits par le pH d'une part, et le chlorure de guanidine d'autre part. Un schéma linéaire minimum comportant trois intermédiaires décrit les résultats cinétiques.

Titre traduit

Conformational study induced by pH of yeast phosphoglycerate kinase

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