Etude du mecanisme de secretion de la levane saccharase chez bacillus subtilis

par FADILA BENYAHIA BABAALI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Roger Acher.

Soutenue en 1989

à Paris 6 .

mots clés

Résumé

La levane saccharase de bacillus subtilis, enzyme secrete pendant la phase exponentielle de croissance, inductible par le saccharase, representant chez un mutant haut producteur 8 a 10% des proteines membranaires, est utilisee comme modele d'etude du mecanisme de secretion proteique. Une forme lourde membranaire (53 kd) possedant une extension n-terminale de 29 acides amines, deja caracterisee dans les minicellules de e. Coli, hote du gene de structure de la ls et une forme legere membranaire (50 kd) de meme masse que la ls exocellulaire ont ete caracterisees comme intermediaires de secretion. Chez b. Subtilis ou les minicellules de e. Coli la maturation de la forme lourde est inhibee en presence d'agents amphiphiles. Purifiees, les deux formes membranaires sont actives qu'en presence d'ion fe#3#+. La forme lourde est convertie in vitro en forme legere par la leader peptidase de e. Coli. Nous proposons un mecanisme de secretion a deux etapes membranaires: la modification covalente de la forme lourde, la secretion de la forme legere resultante, le fer etant necessaire a cette etape. Le remplacement de la glycine, en position 366 (la ls mature est constituee de 444 acides amines) par un aspartate ou une arginine affecte uniquement la seconde etape. Le niveau de secretion du mutant aspartate est augmente d'un facteur 10 en presence de fer. In vitro, le fer augmente d'un facteur trois la vitesse de repliement de la ls sauvage purifiee. L'implication d'ions metalliques souvent requis pour la secretion du proteines de bacillacees pourrait etre un element general du mecanisme de secretion chez ces bacteries gram#+

Titre traduit

Study of mechanism of the secretion of bacillus subtilis levansucrase

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