Clonage, structure primaire et expression de genes nif (fixation de l'azote) d'archaebacteries methanogenes

par NICOLE SOUILLARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de LIONEL SIBOLD.

Soutenue en 1989

à Paris 6 .

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Résumé

Par hybridation selon la methode de southern, de la similarite avec les genes nifh eubacteriens codant pour la proteine a fer de la nitrogenase avaient ete detectee chez tous les methanogenes testes. Dans les souches nif#+, deux regions de similarite ont ete trouvees. Les regions similaires a nifh de quatre methanogenes ont ete clonees. Dans chaque region sequencee, une phase de lecture ouverte similaire aux genes nifh eubacteriens a ete trouvee. Les polypeptides deduits contiennent les regions conservees dans tous les produits de nifh. Les sequences nifh des methanogenes sont pour la plupart aussi eloignees entre elles qu'elles le sont de celles des eubacteries, mais l'orfnifh1 de methanococcus est plus proche des genes nifh des eubacteries. Les etudes de transcription ont montrees que l'orfnifh1 est cotrancrite avec les deux orfs qui la suivent, mais pas avec nifd, elle est exprimee uniquement en conditions de fixation de l'azote, et l'orfnifh2 n'est jamais exprimee. Mc. Thermolithotrophicus fixe l'azote a 652c, sa nitrogenase a une meilleure affinite pour l'azote moleculaire que pour l'acetylene, comme les nitrogenases alternatives d'azotobacter?

Titre traduit

Cloning, primary structure and expression of nif genes (nitrogen fixation) from methanogenic archaebacteria

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