Protéines de la membrane externe régulées par le fer chez Escherichia coli : clonage, expression et propriétés de Iut A et Fep A

par Jean-Christophe Francis Audonnet

Thèse de doctorat en Sciences. Chimie et biologie moléculaire et cellulaire

Sous la direction de Jean Oudar.

Soutenue en 1989

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Jean Oudar.

mots clés

• Escherichia coli
• Régulation cellulaire
• Sidérophores
• Expression génique
• Séquence nucléotidique

Résumé

Pour acquerir le fer, rendu indisponible chez l'hote par suite de sa complexation aux transferrines, les bacteries pathogenes disposent de systemes de transport hautement specialises. L'expression de ces systemes est regulee par la concentration en fer, et se traduit par l'excretion d'un siderophore (compose chelateur du fer) et la synthese d'un recepteur proteique, specifique du siderophore ferrique, situe dans la membrane externe de la bacterie. Les deux principaux recepteurs de siderophores mis en evidence chez les escherichia coli septicemiques sont les proteines ivt a et fep a, qui correspondent respectivement aux siderophores aerobactine et enterobactine. Apres avoir montre que la presence, au niveau de la membrane externe, des proteines regulees par le fer accroit la protection induite par vaccination avec des corps bacteriens entiers, le but de ce travail a ete de produire les proteines ivt a et fep a, par recombinaison genetique, en absence de toute regulation par le fer. La comparaison des sequences nucleotidiques de trois genes ivta, isoles de souches e. Coli d'origines differentes, montre que la conservation antigenique de la proteine ivt a provient d'une stricte conservation du gene ivt a au sein de l'operon aerobactine. Les genes ivt a et fep a ont ete clones dans un vecteur d'expression. L'expression des genes se fait en l'absence de regulation par le fer et conduit a la synthese massive des proteines ivt a et fep a et de leurs precurseurs sous forme d'inclusions intracytoplasmiques, en meme temps que les recepteurs synthetises s'integrent de facon normale dans la membrane externe. Ces derniers sont fonctionnellement et antigeniquement identiques a leurs homologues naturels

Titre traduit

Iron-regulated outer membrane proteins in escherichia coli: cloning, expression and properties of ivt a and fep a

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