Approche biophysicochimique de la transformation directe de protoplastes végétaux par des champs électriques pulsés : cas du tabac

par Marie-Hélène Montane

Thèse de doctorat en Biologie et technologie végétales

Sous la direction de Gilbert Alibert.

Soutenue en 1989

à Toulouse, INPT .

mots clés

• Plantes transgéniques
• Nicotiana tabaccum
• Pavot somnifère
• Électrofusion
• Hybrides somatiques
• Protoplastes végétaux

Résumé

Les champs electriques pulses qui permettent de declencher la fusion cellulaire et le transfert direct d'adn purifie dans des protoplastes est apte a un controle systematique des parametres. Le role des parametres electriques et biologiques est analyse a partir des caracteristiques electriques associees a quatre evenements induits par l'application d'impulsions permeabilisantes: fuite d'atp, incorporation de colorants, modulation de la division et letalite. Une specificite des protoplastes vegetaux est imposee par la presence d'un organite typiquement vegetal: la vacuole. Une deuxieme particularite est la presence d'un ensemble de sous-populations physiologiques au sein d'une suspension. L'application de cette methode a permis de regenerer des plantes transgeniques fertiles et des hybrides somatiques complementes au niveau nucleaire et cytoplasmique. De plus, une electroactivation de la division cellulaire associee a l'etat permeabilise est mise en evidence. Une modelisation des profils d'electropermeabilisation permet de rationaliser la methode jusqu'ici utilisee de facon empirique

Titre traduit

Biophysical analysis of the role of electrical and biological parameters in tobacco protoplast electro pêrmeabilisation : obtaining of somatic hybrids and transgenis plants

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