Identification de triterpènes naturels actifs contre Toxoplasma gondii.

par Pierre Darme

Projet de thèse en Médecine

Thèses en préparation à Reims , dans le cadre de Ecole doctorale Sciences Fondamentales et Santé (Reims, Marne) , en partenariat avec ESCAPE - Epidémiosurveillance de protozooses à transmission alimentaire et vectorielle (laboratoire) depuis le 15-10-2018 .


  • Résumé

    Toxoplasma gondii est un parasite protozoaire intracellulaire obligatoire, responsable de la toxoplasmose. Les différents traitements mis en œuvre contre la toxoplasmose reposent principalement sur une association médicamenteuse pyriméthamine/sulfadoxine. L'équipe de recherche EA 7510 en collaboration avec l'ICMR UMR 7312 a identifié des substances naturelles actives issues d'extraits d'écorces d'aulne (Alnus glutinosa). L'extrait n-heptane a montré une forte activité antiparasitaire, et notamment la bétuline et ses dérivés, qui appartiennent à famille des triterpènes. Les premiers essais d'identification des composés actifs ont permis d'isoler principalement des dérivés lupanes (acide bétulinique….) et un dérivé oléanane de type maslinique. Actuellement, parmi les triterpènes, seul l'acide maslinique a montré une activité anti-toxoplasmique. Tenant compte des résultats précédents de nos laboratoires et des publications, l'identification de triterpènes naturels actifs contre T. gondii sera poursuivie vers les dérivés lupane et oléanane en combinant une approche de type chimiotaxonomie, l'utilisation d'outils de déréplication d'extraits chimiquement complexes développés à l'ICMR et le criblage biologique sur fractions et composés purifiés. Les outils de la plateforme d'établissement AEBB, au travers du plateau technique PlAneT permettront l'analyse structurale des différents composés d'intérêt. La préparation des extraits ainsi que les étapes de purification seront réalisées en mobilisant des techniques telles que l'extraction sous CO2 supercritique, la Chromatographie de Partage Centrifuge ou la CLHP. Le matériel de départ sera constitué d'écorces d'arbres de nos régions pour lesquelles une campagne de récolte de grande envergure (impact de la période de récolte, du lieu précis sur une dizaine d'essences) a été engagée depuis 2 ans. Les composés d'intérêt seront criblés en mélange puis purifiés, et les plus actifs seront évalués sur un test de chimiosensibilité antitoxoplasmique afin de déterminer la CC50, la CI50 et ainsi l'Indice de Sélectivité (IS). Les composés présentant un IS suffisant seront purifiés dans des quantités suffisantes pour engager des études permettant l'identification de leurs cibles et/ou leur mécanisme d'action sur le parasite. Mots clés : Toxoplasma gondii, Alnus glutinosa, triterpènes, chimiosensibilité, cible thérapeutique

  • Titre traduit

    Identification of active natural triterpenes against Toxoplasma gondii.


  • Résumé

    Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite, that causes the disease toxoplasmosis. The actual treatments against toxoplasmosis are mainly based on a pyrimethamin/sulfadoxin combination. The research team EA 7510 in collaboration with ICMR UMR 7312 identified natural substances actives extracted from alder bark extracts (Alnus glutinosa). The n-heptane extract has shown a strong antiparasitic activity, including betulin and its derivatives, which belong to the triterpene family. The first trials of identification of those compounds let us isolate lupane derivatives (e.g. betulinic acid) and an oleanane derivative of maslinic type. For now, among the triterpenes, only maslinic acid has shown an anti-toxoplasmosis activity. Considering the previous results obtained in our laboratories and the publications, the identification of natural triterpenes active against T. gondii will be oriented towards lupane and oleanane derivatives, combining a chemotaxonomy approach, the use of dereplication tools developed at ICMR for chemically complex extracts and biological screening on fractions and pure compounds. Tools of the AEBB development platform, through PlAneT technical platform to perform structural analyses of the different interesting compounds. The extracts preparation and the purification steps will be completed using other techniques like supercritical CO2, Coutercurrent Chromatographie or HPLC. The source material will be composed of tree bark from our regions for which a large-scale harvest campaign (impact of the harvest period, precise locaiton on a dozen species) has been initiated for two years. The interesting compounds will be screened in a mixture and then purified, and the most active will be evaluated on an antitoxoplasmic chemosensitivity test to determine the CC50, the IC50 and then the Selectivity Index (SI). Compounds with sufficient IS will be purified in sufficient amounts to initiate studies to identify their targets and / or their mechanism of action on the parasite. Key words: Toxoplasma gondii, Alnus glutinosa, triterpenes, chimiosensibility, thérapeutic target