Compréhension des rôles des complexes Nob1/Pno1 et RPS14/Cinap dans la maturation cytoplasmique de la petite sous-unité (pré-40S) chez les eucaryotes

par Raivoniaina Raoelijaona

Projet de thèse en Biochimie

Sous la direction de Stéphane Thore.

Thèses en préparation à Bordeaux , dans le cadre de Sciences de la Vie et de la Santé , en partenariat avec Acides nucléiques : Régulations Naturelles et Artificielles (laboratoire) et de Structural biochemistry (equipe de recherche) depuis le 03-10-2016 .


  • Résumé

    Le ribosome eucaryote est un complexe nucléoprotéique composé de deux sous unités: la grande 60S et la petite 40S. Cette machinerie est universellement responsable de la traduction de l'ARN messager en protéine. L'assemblage du ribosome est un processus complexe et bien régulé qui nécessite plus de 200 facteurs de la biogenèse et environ 70 petits ARN non codants (snoRNA). Grâce aux études biochimiques et les avancées de la microscopie électronique concernant la détermination de structure à haute résolution des grands complexes, différentes structures ont été résolues permettant d'identifier les étapes de la biogenèse du ribosome ainsi que les différents acteurs participant à ce processus. Parmi les différents facteurs d'assemblage impliqués dans la maturation de la petite sous unité, deux d'entre eux sont responsables de maturation tardive du pre-40S: l'endonucléase Nob1 (Nin One binding protein) qui catalyse le clivage du precursseur de l'ARN 18S au niveau du site D et son partenaire pno1 (protein associated to Nob1). Afin de mieux comprendre le mécanisme de reconnaissance entre le complexe Nob1-pno1 avec l'ARN ribosomique ainsi que l'activité de l'endonucléase, une étude structure-fonction du complexe Nob1-pno1 peut être mis en place. Dans un premier temps des essaies biochimiques seront effectués pour pouvoir reconstituer le complexe in-vitro ensuite il faudra cartographier le site d'interaction de Nob1 avec son partenaire. L'activité enzymatique de l'endonucléase seul ou en complexe avec son partenaire sera également étudié. Enfin la détermination de la structure tridimensionnelle du complexe Nob1-pno1 en présence ou en absence de l'ARN ribosomique permettra d'avoir des informations à l'échelle atomique.

  • Titre traduit

    Understanding Nob1/Pno1 and RPS14/Cinap complexes roles in the cytoplasmic maturation of the eukaryotic small ribosomal subunit (pre-40S)


  • Résumé

    Eukaryotic ribosome are nucleoprotein complex universally responsible of protein synthesis. This translational machinery is made of two unequal subunits: the large one 60S and the the small subunit 40S. Ribosome assembly is a highly regulated and complex process that requires more than 200 biogenesis factors and approximatly 70 small nucleolar RNA (snoRNA). Biochemical studies and advances in electron microscopy give structural snapshot of some of the ribosome assembly stage but also identify biogenesis factors involve in this process. Two assembly factors are required in the pre-40S late stage maturation: Nob1(Nin one binding protein), endonuclease that catalyzes the cleavage of the 18S RNA precurssor at site D and its partner pno1 (protein associated to Nob1). In order to better unsterstand the mecanism behind Nob-pno1 complex recognition and Nob1 activity regarding the small subunit final maturation, a structural and functional approach can be established. First of all, biochemical assays will be performed in order to reconstitute the complex in-vitro. Then a protein protein interaction mapping experiment will help to identify which part of Nob1 interacts with pno1. After that, some binding and activity test will be studied. Finally, 3D structure determination of the Nob1-pno1 complex with or without the rRNA will give atomic informations.