Etude de l'activité des canaux ioniques voltage-dépendants à l'aide de la technique du transfert d'énergie en résonance de bioluminescence (BRET)

par Yann Chappe

Projet de thèse en Biochimie

Sous la direction de Yann Percherancier.

Thèses en préparation à Bordeaux , dans le cadre de Sciences de la Vie et de la Santé , en partenariat avec Laboratoire de l'Intégration du Matériau au Système (laboratoire) et de Bioélectromagnétisme (equipe de recherche) depuis le 12-09-2018 .


  • Résumé

    Nous avons récemment montré qu'il était possible d'étudier l'activité des canaux TRP à l'aide de la technique du transfert d'énergie en résonance de bioluminescence (BRET) (Ruigrok HJ; 2017; Biophysical Journal). Grâce au BRET, les changements de conformation des canaux TRP lors de leur ouverture ainsi que les interactions des canaux TRP avec des protéines effectrices sont quantifiables en temps réel et sur cellules vivantes. Nous souhaitons tirer profit des avantages de la technique du BRET pour approfondir la pharmacologie des canaux TRP, mais également d'autres canaux voltage-dépendants dans différents modes d'activations, en particulier l'activation par les ligands, la température, l'étirement et la pression. A l'aide du BRET, nous déterminerons si ces différents modes d'activations font intervenir des états conformationnels et/ou des interactions avec des partenaires cellulaires différents. Si tel est le cas, nous approfondirons les mécanismes moléculaires inhérents à ce biais de signalisation fonctionnelle. Nous nous intéresserons en particulier aux thermo-TRP qui peuvent ressentir différentes températures allant du froid (TRPA1 et TRPM8) aux températures modérés (TRPM2, TRPV3 et TRPV4) et aux températures élevées (TRPV1). Finalement, nous étudierons également l'effet de l'exposition aux ondes radiofréquences qui, étonnamment, pourrait activer une réponse au froid plutôt qu'une réponse à la chaleur.

  • Titre traduit

    The activity of voltage-dependent ions channels in the light of the Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) technique


  • Résumé

    We have recently shown that it is possible to study the activity of TRP channels using the Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) technique (Ruigrok HJ, 2017, Biophysical Journal). Thanks to BRET, the conformational changes of the TRP channels during their gating and the interactions of the TRP channels with effector proteins can be monitored in real time and on living cells. We will take advantage of the BRET technique to study the pharmacology of TRP channels, as well as other ions channels, in various modes of activation: activation by chemical ligands, temperature, stretching and pressure. Using BRET, we will determine whether these different modes of activation involve different conformational states and / or interactions with different cellular partners. If this is the case, we will explore the molecular mechanisms that are responsible for this functional signaling bias. We will be particularly interested in thermo-TRPs that can experience different temperatures ranging from cold (TRPA1 and TRPM8) to moderate temperatures (TRPM2, TRPV3 and TRPV4) and high temperatures (TRPV1). Finally, we will also study the effect of cell exposure to radiofrequency waves which, surprisingly, could activate a response to the cold rather than a response to heat.