Matériaux fonctionnels par assemblage de microsphères composites de chitosane/collagène pour l'ingénierie tissulaire

par David Azria

Thèse de doctorat en Chimie des biomolécules et applications

Sous la direction de Emmanuel Belamie.

Thèses en préparation à Paris Sciences et Lettres , dans le cadre de École doctorale de l'École pratique des hautes études (Paris) , en partenariat avec ICGM - Institut Charles Gerhardt de Montpellier (laboratoire) et de École pratique des hautes études (Paris) (établissement opérateur d'inscription) .


  • Résumé

    L'interruption du nerf périphérique à la suite d'une blessure conduit à une dégénération locale. Si l'interruption est trop grande, la croissance neuronale spontanée ne permet pas une récupération fonctionnelle du nerf. Parmi les différentes stratégies thérapeutiques, l'autogreffe est la plus efficace mais conduit à une morbidité au niveau du site donneur. Dans l'approche par ingénierie tissulaire que nous avons étudiée, des conduits de nerfs sont élaborés à l'aide de matériaux biocompatibles pour orienter la repousse et la régénération du nerf. Dans ce contexte, nous avons étudié des matériaux assemblés à l'aide de microsphères fonctionnalisées pour former un gradient de facteurs neurotrophiques afin de guider la régénération du nerf au sein d'un guide tubulaire. Nous avons étudié l'élaboration de microsphères de chitosane et collagène à partir d'une émulsion produite de manière contrôlée à l'aide d'une technologie microfluidique. La solidification des gouttelettes de l'émulsion ainsi formée a été réalisée par la diffusion de vapeurs d'ammoniac. La fonctionnalisation des microsphères a été étudiée et caractérisée à l'aide de molécules modèles fluorescentes, la FITC (Fluorescéine Isothiocyanate) et une protéine (BSA, Bovine Serum Albumin) couplée à la FITC. Ces microsphères fonctionnalisées ont été ensuite assemblées sous forme de membranes de plusieurs centimètres présentant un gradient de fonctionnalisation. Enfin, des études préliminaires ont montré la faisabilité d'une implantation chez l'animal par enroulement et suture des membranes au niveau du nerf sciatique. Ces travaux ont permis d'établir la preuve de concept de cette approche pour élaborer des conduits fonctionnels et devra être poursuivie par une étude de régénération nerveuse fonctionnelle.

  • Titre traduit

    Functionnal materials by assembly of composite chitosan-collagen microspheres for tissue engineering


  • Résumé

    Injury of the peripheral nerve leads to local degeneration at the damaged site. If the injury results in a large nerve gap, spontaneous regeneration does not lead to functional recovery of the nerve. Among the several therapeutic strategies available, autograft is currently the most efficient technique but is associated with morbidity at the donor site. In the tissue engineering approach that we have investigated, nerve guides are typically elaborated with biocompatible materials to orient nerve outgrowth and regeneration. In this context, we have evaluated materials assembled with functionalized microspheres to form a gradient of neurotrophic factors with the aim of guiding nerve regeneration in the lumen of tubular conduits. We have studied the elaboration of chitosan and collagen microspheres from an emulsion generated in a controlled manner using a microfluidic technology. The solidification of the emulsion droplets was then achieved by the diffusion of ammonia vapors. The microspheres functionalization has been investigated and characterized using model fluorescent molecules, namely FITC (Fluorescein Isothiocyanate) and a protein (BSA, Bovine Serum Albumin) labeled with FITC. These functionalized microspheres were then assembled in the form of membranes with typical dimensions in the centimeter range, and exhibiting a functionalization gradient. Finally, preliminary experiments have demonstrated the possibility of animal implantation by rolling and suturing the membranes to a sectioned sciatic nerve. This work has allowed us to establish the proof of concept of this approach to elaborate functional nerve conduits and will need to be followed by complete study of functional nerve regeneration.