Analyse structurale des antagonistes de l'interféron de pneumovirus
Auteur / Autrice : | Claire-marie Caseau |
Direction : | Christina Sizun |
Type : | Projet de thèse |
Discipline(s) : | Biochimie et biologie structurale |
Date : | Inscription en doctorat le 01/10/2017 |
Etablissement(s) : | université Paris-Saclay |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Innovation thérapeutique : du fondamental à l'appliqué |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Institut de Chimie des Substances Naturelles |
référent : Université Paris-Saclay. Faculté de pharmacie (Orsay, Essonne ; 2020-....) |
Résumé
Le virus respiratoire syncytial humain (RSV) est le principal agent responsable d'infections graves des voies respiratoires basses chez le nouveau-né. Actuellement il n'existe ni vaccin ni traitement réellement efficace. Le RSV est du genre Pneumovirus, famille des Pneumoviridae, ordre des Mononegavirales. Il induit une réponse immunitaire remarquablement faible en comparaison avec d'autres virus apparentés. En effet il a évolué vers une stratégie très spécifique d'évasion des mécanismes de défense immunitaire de l'hôte : il code pour deux protéines dites non structurales, NS1 et NS2. RSV NS1 et NS2 sont hautement conservées à travers les espèces (humain, bovin and ovin), mais nont pas dhomologues en-dehors des pneumovirus. Il a été montré que hRSV NS1 et NS2 étaient entre autres des antagonistes des interférons de type I et III. Elles sont toutes deux considérées comme des cibles potentielles pour la prévention et le traitement du RSV. Mais si lon connaît leurs fonctions, leurs mécanismes d'action ne sont pas bien connus et ny a que peu de bases structurales pour les étayer. Une seule structure cristallographique de NS1 a été publiée et aucune information structurale nest disponible pour NS2. En revanche il a été suggéré que ces protéines pouvaient sassocier entre elles pour former des oligomères de taille plus importante qui pourraient être à lorigine dun dégradosome viral. Lobjectif de ma thèse est de caractériser dun point de vue structural les différents états doligomerisation de la protéine NS1 ainsi que les transitions de lun à lautre afin de mieux comprendre leur implication dans la pathologie. Pour cela je produis NS1 sous forme isolée et purifiée et je combine des techniques biophysiques de basse résolution telle que la diffusion dynamique de la lumière et des techniques de haute résolution telle que la résonance magnétique nucléaire (RMN) en solution ou à létat solide ou encore dans des conditions de haute pression. Leptosphaeria maculans est un pathogène de Brassica napus, le colza. Pour linstant aucun fongicide nexiste pour lutter contre ce champignon, mais des phénotypes de résistance sont apparus au sein du colza. Ce phénomène de résistance est le produit dune reconnaissance par la plante des protéines dites « effecteurs » du colza, suivi par une réponse immunitaire adaptée. Mais si lon observe donc une course entre plante et pathogène pour produire et/ou reconnaitre des nouveaux effecteurs, on ne comprend encore très peu les fonctions et structures de ces effecteurs fongiques, qui ne présentent pas ou très peu dhomologie entre eux. Mon projet de thèse se porte sur la caractérisation structurale de la protéine AvrLm1, le premier effecteur de L.maculans contre B.napus. Cette protéine ne cristallise pas à linverse de certains autres membres de sa famille, qui eux semblerait présenter une certaine homologie de structure. Je cherche à déterminer la structure par résonance magnétique nucléaire en travaillant avec deux formes de AvrLm1 : une forme entière qui comporte un long bras flexible, ainsi quune forme tronquée, avec une partie de ce bras flexible en moins.