Analyses lipidiques de macrophages : de la lipidomique à l'oxylipidomique

par Guillaume Sayet

Projet de thèse en Chimie

Sous la direction de Pierre Chaminade.

Thèses en préparation à Paris Saclay , dans le cadre de Sciences Chimiques : Molécules, Matériaux, Instrumentation et Biosystèmes , en partenariat avec Lipides, Systèmes analytiques et biologiques (laboratoire) et de Université Paris-Sud (établissement de préparation de la thèse) depuis le 01-10-2014 .


  • Résumé

    Une étude des lipides de macrophages a été réalisée en utilisant une méthode de chromatographie en phase normale couplée à un spectromètre de masse basse résolution (triple quadripôle) et haute résolution (LTQ-Orbitrap). La rédaction du manuscrit définitif est en cours et comprend 4 parties : 1-Les données obtenues avec le spectromètre de masse basse résolution ont donné lieu à une étude systématique des différents paramètres impliqués dans le prétraitement. Un projet de publication a été soumis dans la revue Analytical and Bioanalytical Chemistry (ABC). Elle a été acceptée sous condition de correction majeure puis refusée. Ce projet est actuellement en cours de correction pour être soumis à publication dans le « Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis ». 2- Une étude descriptive des lipides membranaires a été effectuée sur trois types de macrophages pour réaliser une cartographie du lipidome des macrophages utilisés dans le cadre de l'étude du trafic du cholestérol. Les publications relatives à la description des différentes espèces moléculaires constitutives des macrophages sont relativement peu nombreuses. Cette étude est intégrée dans un projet de publication. 3- La spectrométrie de masse ultra-haute résolution a été utilisée pour caractériser les modifications de composition lipidique de macrophages humains enrichis en acide gras ω3. L'analyse des données fait appel à différents outils chimiométriques, comme les analyses discriminantes, pour connaître les différences d'expression de chaque espèce moléculaire et une régression multivariée pour mettre en relation la modification de ces profils avec une fonction biologique : l'efflux du cholestérol. Cette partie fait aussi partie d'un projet de publication. 4- Le même type d'étude a été effectué sur des macrophages rendus spumeux par addition de cholestérol-LDL. Une publication a été acceptée sur l'étude des gouttelettes lipidiques et la mobilisation du cholestérol. Enfin certains résultats seront ajoutés à la discussion du manuscrit de thèse concernant la possibilité d'utiliser une méthode chromatographie liquide à polarité de phase normale pour collecter les différentes fractions phospholipidiques pour l'analyse des phospholipides oxydés.

  • Titre traduit

    Macrophages lipid analysis : from lipidomic to oxylipidomic


  • Résumé

    A macrophage lipid study was performed using a normal phase chromatography method coupled with a low resolution (triple quadrupole) and high resolution (LTQ-Orbitrap) mass spectrometer. The final manuscript is being prepared and consists of 4 parts: 1-The data obtained with the low resolution mass spectrometer gave rise to a systematic study of the various parameters involved in the pretreatment. A draft publication was submitted in the journal Analytical and Bioanalytical Chemistry (ABC). She was accepted on condition of major correction and then refused. This project is currently being revised to be published in the Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2- A descriptive study of membrane lipids was carried out on three types of macrophages to map the lipidoma of the macrophages used in the study of cholesterol trafficking. The publications relating to the description of the various molecular species constituting the macrophages are relatively few in number. This study is part of a publication project. 3- Ultra-high resolution mass spectrometry was used to characterize changes in the lipid composition of human macrophages enriched in ω3 fatty acid. Data analysis uses different chemometric tools, such as discriminant analyzes, to find out the differences in expression of each molecular species and a multivariate regression to link the modification of these profiles with a biological function: the efflux of cholesterol. This part is also part of a publication project. 4- The same type of study was carried out on macrophages rendered foamy by the addition of LDL-cholesterol. A publication was accepted on the study of lipid droplets and the mobilization of cholesterol. Finally, some results will be added to the discussion of the thesis manuscript concerning the possibility of using a liquid chromatography method with normal phase polarity to collect the different phospholipid fractions for the analysis of the oxidized phospholipids.y