Enzymologie du mécanisme de régulation des Peroxyrédoxines par suroxydation au cours de la signalisation cellulaire redox
Auteur / Autrice : | Alexandre Kriznik |
Direction : | Sophie Rahuel-Clermont |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences de la vie et de la santé |
Date : | Soutenance le 22/06/2020 |
Etablissement(s) : | Université de Lorraine |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale BioSE - Biologie, Santé, Environnement |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Ingénierie moléculaire et physiopathologie articulaire (Vandœuvre-lès-Nancy) |
Jury : | Président / Présidente : Nicolas Rouhier |
Examinateurs / Examinatrices : Sophie Rahuel-Clermont, Corinne Lionne, Marie-Thérèse Giudici-Orticoni, Bastien Doumèche | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Corinne Lionne, Marie-Thérèse Giudici-Orticoni |
Mots clés
Résumé
La suroxydation des peroxyrédoxines (Prx) est un mécanisme post-traductionnel essentiel impliqué dans la régulation et la signalisation cellulaire redox. Les Prx sont des peroxydases à thiol, qui réagissent avec les peroxydes pour former un intermédiaire acide sulfénique. Leur sensibilité à la suroxydation dépend de la compétition entre la réaction de sulfinylation et la formation d’un pont disulfure au cours du cycle peroxydase. Cette compétition est contrôlée par une transition conformationnelle entre deux conformations FF : structurée et LU : localement déstructurée. Dans ce projet, nous abordons le mécanisme de suroxydation de Tsa1, la principale Prx1 cytosolique de S. cerevisiae, par des analyses cinétiques à l'état pré-stationnaire en cinétique rapide, à l'état stationnaire et in vivo. Une phase cinétique correspondant à un changement de conformation associé à la transition FF/LU a été identifiée, montrant que la formation de l’acide sulfénique facilite cette transition. L’utilisation de mutants de sensibilité à la suroxydation altérée et de différents substrats peroxydes a permis de montrer que la sensibilité est découplée de l'étape de formation du pont disulfure et ne dépend que des constantes de vitesse de sulfinylation et de transition conformationnelle FF/LU. A partir de ces deux paramètres, nous pouvons prédire l'indice de sensibilité à la suroxydation CHyp1%, une prédiction démontrée in vitro et in vivo.