Etude de l'interface du récepteur de la prolactine par des approches biophysiques, structurales et fonctionnelles

Study of the prolactin receptor interface by biophysical, structural and functional approaches

• Auteur / Autrice : Chi Zhang
• Direction : Vincent Goffin
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie Moléculaire et Cellulaire
• Date : Soutenance en 2012
• Etablissement(s) : Paris 6

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cristallographie

Résonance plasmonique de surface

Prolactine

Résumé

La prolactine (PRL) est une hormone hypophysaire impliquée dans un grand nombre de fonctions physiopathologiques. Elle forme avec son récepteur (PRLR) homodimérisé un complexe trimérique au sein duquel trois sites d’interaction ont été identifiés : chaque protomère de récepteur interagit avec l’hormone via les sites appelés 1 et 2, tandis que l’interaction entre les deux récepteurs est appelée site 3, ou interface. Afin d'élucider les relations structure-fonction du site 3, divers mutants impliquant des résidus de l'interface, sélectionnés à partir de la structure cristallographique du complexe PRL:PRLR2, ont été générés, puis analysés par diverses approches biochimiques, biophysiques (résonance plasmonique de surface, ou SPR), structurales (résonance magnétique nucléaire) et cellulaires. Le résidu Isoleucine 146 est proche de l'interface; une mutation de ce résidu en leucine a été récemment décrite chez l'Homme, et notre laboratoire a montré qu'elle conduisait à un récepteur constitutivement actif. Divers mutants de la position 146 ont également été générés et caractérisés selon les approches décrites ci-dessus. Nos résultats montrent que tant les résidus de l'interface que le résidu Ile146 jouent un rôle clé dans le mécanisme d'activation du PRLR, les mutations réalisées affectant l'affinité du récepteur pour le ligand, l'activité basale du PRLR et/ou la sélectivité des cascades de signalisation activées, que ce soit constitutivement ou en réponse au ligand. Enfin, nous avons jeté les bases d'une approche nouvelle approche de SPR qui permettra à terme d'élucider les dynamiques d'interaction du récepteur entier avec divers ligands dans un contexte membranaire