Recherche de gènes impliqués dans l'installation du strongle Haemonchus contortus par une approche transcriptomique

Research of genes implied in the installation of the gastro-intestinal nematode Haemonchus contortus by a transcriptomic approach

• Auteur / Autrice : Alexia Delannoy- Normand
• Direction : Jacques Cabaret, Cédric Neveu
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la Vie et de la Santé
• Date : Soutenance le 08/09/2010
• Etablissement(s) : Tours
• Ecole(s) doctorale(s) : Ecole doctorale Santé, sciences, technologies (Tours)
• Partenaire(s) de recherche : Equipe de recherche : Infectiologie et santé publique (Tours)
• Jury : Président / Présidente : Isabelle Dimier-Poisson
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Odile Bain
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Philippe Jacquiet, Philippe Castagnone

Mots clés

Mots clés contrôlés

Transthyrétine

Hybridation suppressive soustractive

Haemonchus contortus

Transcriptome

Lutte biologique contre

Trichostrongyloïdes

Vaccins antiparasitaires

Protéines recombinées

Réponse immunitaire

Médicaments -- Récepteurs

Anthelminthiques

Chez les animaux

Nématodose

Lipases

Mots clés libres

Teladorsagia circumcincta

Trichostrongylus colubriformis

Résumé

Parmi les nématodes gastro-intestinaux ayant un impact majeur sur la santé des ruminants Haemonchus contortus est l’espèce la plus pathogène. Actuellement, le contrôle des populations parasitaires repose sur les traitements anthelminthiques dont l’efficacité est limitée par l’émergence de parasites résistants. L'établissement de nouvelles stratégies de lutte (thérapeutiques ou vaccinales) repose actuellement sur l'identification de nouvelles cibles moléculaires. Ainsi, les gènes spécifiquement régulés lors de la phase précoce d’interaction du parasite H. contortus avec son hôte sont des cibles de choix. Afin d’identifier ces gènes, 4 banques d’H. contortus enrichies en ADNc spécifiquement exprimés au stade L4 (5 jours après infestation) ont été obtenues par la technique d’Hybridation Suppressive et Soustractive (SSH). Sur 400 clones criblés (dot-blot, RT-PCR), 51 clones d’intérêts ont été regroupés en 10 contigs. Les candidats possédant un peptide signal de sécrétion ont fait l’objet d’une étude plus approfondie. Les homologues de ces candidats ont été recherchés chez les deux autres principales espèces de strongles gastro-intestinaux (T. circumcincta et T. colubriformis) dans le but d’évaluer leur polymorphisme. La production et la purification des protéines recombinantes correspondant à ces candidats a également été réalisée afin de tester leur éventuel pouvoir immunogène.

Gastro-intestinal nematodes such as Haemonchus contortus have a major impact on health of small ruminants world-wide. The control of infections remains largely based on anthelminthic treatments, but spreading of resistance has reduced their efficiency. An attractive solution would be the development of anti-nematode vaccines. Genes expressed during the early parasitic stage of H. contortus constituted our main targets. We have developed an approach based on SSH (Suppressive Subtractive Hybridization) technique and generated 4 subtracted cDNA libraries of H. contortus enriched in cDNA specifically expressed during L4 stage (five days post infection). 400 clones were analyzed by dot-blotand 51 clones regrouped in 10 contigs. All contigs were validated by RT-PCR. Homologues of candidates possessing a signal peptide were searched in T. colubriformis and T. circumcincta to evaluate their polymorphism. Recombinant proteins of theses candidates were produced and purified in order to know if they have a good vaccine potential with cross protection against two major gastro-intestinal nematodes.