-galactosidases et synthese regioselective d'oligosaccharides

• Auteur / Autrice : PETRA SPANGENBERG
• Direction : Claude Rabiller
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Nantes

Résumé

Les polyosides, du fait de leur implication dans les reactions immunologiques presentent de nombreuses applications therapeutiques. La synthese de ces composes est importante parce qu'il est rarement possible de les extraire du milieu naturel du fait de leur faible abondance. La synthese regioselective de ces composes par voie chimique est souvent delicate du fait du grand nombre d'etapes de protection-deprotection necessaires. Les enzymes par la selectivite de leur action peuvent contribuer a l'avenement de methodologies reduisant considerablement l'ensemble de ces manipulations. Les glycosylhydrolases, qui presentent une activite transferase repondent efficacement a cette problematique. L'objectif du travail presente dans cette these est d'evaluer les capacites des -galactosidases de grains de cafe vert, de b. Stearothermophilus (aga a, aga b, aga 285), de t. Brockianus (aga t), d'e. Coli (raf a) et de s. Mutans (aga 1) a synthetiser dans les meilleurs conditions des disaccharides de facon regio-et stereoselective. Nos resultats indiquent que les meilleurs rendements en synthese sont obtenus si on controle l'activite hydrolytique de ces enzymes grace a un suivi cinetique rigoureux des reactions. Par ailleurs, nous avons developpe une nouvelle strategie utilisant la capacite des glycosidases dans la glace. En milieu gele, la reaction d'hydrolyse est reduite au profit de la synthese. Une importante augmentation des rendements de transglycosylation est ainsi observee. La regioselectivite du couplage glycosidique n'est jamais totale et depend de la source enzymatique utilisee. Dans le but d'ameliorer cette propriete, nous avons mene des experiences de mutagenese aleatoire sur une -galactosidase issue de b. Stearothermophilus. L'un des clones ainsi obtenu a totalement inverse sa regioselectivite initiale de type -(16) en regioselectivite de type -(12).