Recherche Avancée

Thèse soutenue

Synthèses chimiques et enzymatiques de glycomimétiques pour l'étude de cellulases

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Auteur / Autrice : Sébastien Fort
Direction : Hugues Driguez
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Chimie moléculaire
Date : Soutenance en 2000
Etablissement(s) : Grenoble 1

Résumé

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Les cellulases, enzymes responsables de la degradation de la cellulose, sont couramment utilisees dans les industries textiles (lessives, detergents) et papetieres (desencrage du papier). Le developpement de nouvelles enzymes (plus stables et plus actives) pour la modification selective de la cellulose a l'echelle industrielle, necessite une parfaite connaissance du mode d'action des cellulases. Afin d'etudier les relations entre la structure et l'activite de ces glycoside hydrolases, nous avons synthetise differents inhibiteurs de cellulases destines a des etudes cristallographiques de complexes enzyme/inhibiteur. Apres une mise au point bibliographique sur les cellulases, nous decrivons dans le deuxieme chapitre la conception et la synthese d'un aza-c-pseudo-disaccharide susceptible de mimer la distorsion du substrat observee dans le sous-site 1 du site actif des -glycoside hydrolases qui agissent avec retention de configuration. Dans le troisieme chapitre, nous presentons la preparation d'une /-thio-cellodextrine et l'etude aux rayons x du complexe enzyme/inhibiteur avec la cellulase cel5a de bacillus agaradhaerans. Ce tetrasaccharide presente une inhibition competitive sur differentes cellulases et grace a la presence d'une liaison , il se fixe dans le centre actif de cel5a en evitant la distorsion necessaire dans le sous-site 1. Enfin, le dernier chapitre aborde l'utilisation en synthese oligosaccharidique d'une cellulase issue de l'ingenierie des proteines. Le mutant cel7b e197a, depourvu d'activite hydrolytique par mutagenese dirigee, catalyse avec efficacite et selectivite la condensation de mono- et disaccharides sur les fluorures d'-lactosyle et cellobiosyle.