Les protéases de paroi des lactocoques

par Bénédicte Flambard

Thèse de doctorat en Sciences. Physiologie des organismes et des populations

Sous la direction de Vincent Juillard.

Soutenue en 1999

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Vincent Juillard.


  • Résumé

    Les lactocoques, pour se developper dans le lait, requierent l'action d'une protease degradant les caseines du lait. Cette enzyme est ancree a la paroi de la bacterie. Les souches presentent une protease de type p i ou de type p i i i. L'objectif initial de ce travail etait d'evaluer l'impact du type de protease porte par la souche sur sa croissance. L'etude de la croissance de deux souches genetiquement modifiees, ne differant que par le type de protease qu'elles synthetisent, a montre que (i) la vitesse de croissance de la souche prtp i etait ralentie par la souche prtp i i i. Les peptides accumules dans le lait par la souche prtp i i i ont un effet sur le taux de synthese de la protease de la souche prtp i, (ii) les apports en acides amines dependent du type de protease. Ces resultats permettent donc de supposer que les produits de degradation issus des caseines different avec le type d'enzyme. Ceci a ete verifie avec un substrat modele, la caseine. Cette demarche a permis de plus de montrer que la specificite de la protease de type p i i i varie selon que l'enzyme est native (ancree aux cellules) ou purifiee (liberee dans le milieu en absence de ca 2 +). Cette liberation est la consequence d'un changement de conformation de l'enzyme qui conduit a une autoproteolyse. Pour determiner quelle etape etait responsable du changement de specificite, il convenait de decoupler le changement de conformation de l'autoproteolyse. Cela necessite l'identification, puis la mutation du site d'autodigestion de l'enzyme, jusqu'alors inconnu. Pour atteindre le premier objectif, on a developpe une demarche complexe (insertion, dans la protease, d'une proteine rapporteur et d'un site de clivage chimique), le sequencage de la proteine liberee dans le milieu s'etant heurte a des difficultes d'ordre technique.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (123 f..)
  • Annexes : Bibliogr. f. 109-122

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