Mécanismes d’activation des pDCs par la souche vaccinale 17D du virus de la fièvre jaune

Mechanisms of plasmacytoid dendritic cells stimulation by the yellow fever vaccine 17D

• Auteur / Autrice : Laura Sinigaglia
• Direction : Nolwenn Jouvenet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé
• Date : Soutenance le 28/11/2017
• Etablissement(s) : Sorbonne Paris Cité
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Bio Sorbonne Paris Cité (Paris ; 2014-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Unité de Virologie moléculaire et Vaccinologie (Paris)
• Jury : Président / Présidente : Sylvie Van der Werf
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Sylvie Van der Werf, Anne-Sophie Beignon, Jean Dubuisson, Bruno Guy, Jean-Philippe Herbeuval
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Anne-Sophie Beignon, Jean Dubuisson

Mots clés

Mots clés contrôlés

Exosomes

Récepteur de type Toll-7

Interférons

Vaccin antiamaril

Cellules dendritiques

Virus de la fièvre jaune

Mots clés libres

Cellules dendritiques plasmacytoides

Virus de la fièvre jaune

Souche vaccinale 17D

Interferons

TLR7

Exosomes

Plasmacytoid dendritic cells

Yellow fever virus

Yellow fever vaccine 17D

Antiviral immunity

Interferons

TLR7

Exosomes

Résumé

La fièvre jaune est une maladie hémorragique virale aiguë causée par un arbovirus du genre Flavivirus. La souche vaccinale 17D du virus de la fièvre jaune, qui a été développé empiriquement dans les années 30, est extrêmement efficace. Les mécanismes moléculaires qui sont à l’origine de son efficacité sont mal connus. Les travaux menés sur modèles animaux suggèrent que la réponse immunitaire innée joue un rôle clé dans cette efficacité. Les cellules dendritiques plasmacytoïdes(pDCs) sont des cellules immunitaires qui produisent de grandes quantités decytokines antivirales médiatrices de la réponse immunitaire innée. Nous avons caractérisé la réponse immunitaire innée induite par la reconnaissance du vaccin17D par les pDCs. Nous avons observé que des cellules de foie infectées par 17D stimulent efficacement les pDCs lors d’étroits contacts cellule-cellule. Nous avons montré que le récepteur endosomal TLR7 des pDCs est responsable de la reconnaissance de l’ARN viral. La stimulation des pDCs par les cellules infectées n’est pas affectée parla présence d’anticorps qui neutralisent l’infection. Des cellules exprimant une version tronquée du génome de 17D stimulent les pDCs. Enfin, des exosomes isolés de surnageant de culture de cellules infectées par 17D ne stimulent pas les pDCs.Nous proposons que les cellules infectées par 17D stimulent les pDCs aussi via la production d’ARN viraux non-encapsidés qui sont transférés via des contacts cellule-cellule. Nos résultats aident à mieux comprendre les stratégies moléculaires mises en place par les pDCs pour détecter les infections virales ainsi que les mécanismes moléculaires à l’origine de l’efficacité du vaccin 17D.

Yellow fever virus (YFV) is the prototype member of the genus flavivirus, a group of enveloped RNA viruses that includes Dengue and Zika viruses. The YFV live vaccine 17D was developed empirically in the 1930Õs by passaging a clinical isolate in monkeys and in vertebrate tissues. The molecular determinants for virulence attenuation of 17D are poorly understood. Non-human primate studies suggest that the robust interferon (IFN) response induced by 17D infection is key to its efficacy. Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are highly specialized immune cells that represent the most potent source of IFNs in the early phase of many viral infections. We report here that sensing of 17D-infected cells by pDCs was more efficient than sensing of cell-free viruses. 17D-infected cells stimulated pDCs to produce type-I and -III IFNs in a TLR7- and cell contact- dependent manner. Such stimulation was unaffected the presence of YFV neutralizing antibodies. Viral RNA produced by cells replicating a release-deficient 17D mutant or a 17D subgenomic RNA lacking structural protein-coding sequences retained its ability to induce IFNs in pDCs. Finally, exposure to exosomes purified from 17D-infected cells failed to stimulate pDCs. Our data thus indicate that packaging of immunostimulatory RNA into virions or exosomes is not required for pDCs stimulation, suggesting that viral RNA might be transferred from infected cells to pDCs without being released into the extracellular milieu. Such potent pDC-mediated IFN secretion might stimulate the host adaptive immune response to produce YFV neutralizing antibodies with limited possibilities for viral counteraction.