Etude fonctionnelle des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite B dans l'assemblage et le caractère infectieux des virions HBV et HDV

Functional study of the hepatitis B virus envelope proteins in the assembly and infectivity of the HBV and HDV virions

• Auteur / Autrice : Romain Julithe
• Direction : Camille Sureau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie et virologie
• Date : Soutenance en 2013
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Virion

Anticorps

Morphogenèse

Virus de l'hépatite B

Hépatite B

Glycosylation

Génotype

Résumé

There are 10 genotypes of hepatitis B virus (HBV) in the world. The HBV and hepatitis delta virus (HDV) envelope proteins have, in the position 146 of the common's domain, a N-Glycosylation site. Only 50% of these proteins are always glycosylated, whatever the genotype. The first part of my project consists in studying the influence of the HBV genetic variability with regard to the envelope protein's activities at different step of the viral circle and with regard to the neutralization's efficiency of anti-HBSAG antibodies. The results show that variations in the aminoacid sequence of the HBV proteins have minor consequences on the assembly/secretion of subviral particles (SVP), HDV virions and the infectivity. However, sequence variations in the epitope of the A-determinant of the antigenic loop (AGL) affect the neutralizing activity of the anti-HBSAG antibodies. The second part of my project consists on determining the function(s) associated with the N146 glycosylation of the envelope proteins. Our results show that N146 glycosylation isn't essential for the HBV SVP and HDV virions production, but important for the assembly/secretion of the HBV virions. This glycosylation is not required for infectivity and hyperglycosylated envelope proteins - by adding several glycosylation sites in the AGL - is compatible with the SVP production and the conservation of the infectivity, in the AGL presents less than 4 glycans. We also show that hyperglycosylation prevents access of the anti-HBSAG Monoconal antibodies to epitope of the A-determinant.

Il existe 10 génotypes du virus de l'hépatite B (HBV) dans le monde. Les protéines d'enveloppe HBV et du virus de l'hépatite delta (HDV) possèdent en position 146 de leur domaine commun un site de N-Glycosylation. Seules 50% de ces protéines sont toujours glycosylées quel que soit le génotype. La première partie de mon projet a consisté à étudier l'influence de la variabilité génétique HBV sur l'activité des protéines d'enveloppe à différentes étapes du cycle viral et sur l'efficacité de neutralisation par des anticorps anti-AGHBS. Les résultats montrent que les variations de séquence des protéines HBV ont peu de conséquences sur l'efficacité d'assemblage/sécrétion des particules sous virales (PSV) et virions HDV, et sur le caractère infectieux. En revanche, les variations de séquences des épitopes du déterminant-A de la boucle antigénique (BAG) affectent l'activité neutralisante des anticorps. La seconde partie de mon projet a pour but de déterminer la (ou les) fonction(s) associée(s) au phénomène de glycosylation N146 des protéines d'enveloppe. Nos résultats montrent que la glycosylation N146 n'est pas essentielle à la production des PSV HBV et des virions HDV, mais elle est importante pour l'assemblage/sécrétion des virions HBV. Cette glycosylation n'est pas nécessaire au caractère infectieux, et une hyperglycosylation des protéines d'enveloppe -par ajout de plusieurs sites de N-glycosylation- est compatible avec la production de PSV, et avec la préservation du caractère infectieux si la BAG porte moins de 4 glycanes. Nous montrons aussi qu'une hyperglycosylation bloque l'accès d'anticorps monoclonaux anti-AGHBS à certains épitopes du déterminant-A.