Study of cryopreserved human skin allograft viability for use in the treatment of severe burned patients

Etude de la viabilité des allogreffes cutanées cryopréservées à usage thérapeutique chez le grand brûlé

• Auteur / Autrice : Sonia Bouchiha-Gaucher
• Direction : Mohamed Jarraya
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 2010
• Etablissement(s) : Paris 11
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université de Paris-Sud. Faculté de pharmacie (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Allogreffes

Brûlures

Mots clés libres

Banque de tissus

Cicatrisation

Cryoprotectant

Test MTT

Résumé

Le but de notre travail était d’étudier la viabilité des allogreffes cutanées cryopréservées à usage thérapeutique. Nous avons tout d’abord mis au point le test de viabilité MTT sur de la peau de donneurs en état de mort encéphalique. Puis nous avons évalué l’impact du milieu de transport (Ringer Lactate versus RPMI) et du cryoprotectant (Glycérol versus DMSO) sur la peau fraîche, conservée à +4°C (à J2 et J7), et cryopréservée. Les échantillons ont fait également l’objet d’analyses histologiques. Enfin, nous avons tenté de corréler la viabilité des allogreffes à l’efficacité de couverture dans un modèle de xénogreffe homme/souris. Nos résultats indiquent que la viabilité de la peau conservée à +4°C est significativement plus élevée avec le RPMI. Nous n’avons pas noté de différence significative entre Glycérol et DMSO. Le modèle de xénogreffe a montré que la peau cryopréservée est rejetée de façon différée par rapport à la peau fraîche mais que le délai de cicatrisation est équivalent.

The aim of this study was to evaluate the viability of cryopreserved human skin allografts. For this purpose, we developed the MTT assay on skin samples harvested from multi-organ and tissue donors. Then viability was assessed at laboratory reception, during storage at +4°C (at day 2 and day 7), and after cryopréservation and thawing, with two different transport media (Ringer Lactate versus RPMI) and two different cryoprotectants (Glycerol versus DMSO). Histological analysis was performed for each MTT assay. We also tried to correlate allograft viability with efficacy of coverage in a xenograft model (human/mice). Results indicate that when stored at +4°C, skin retains more viability with RPMI, whereas Glycerol and DMSO are equivalent cryoprotectant regardless of the transport medium. In our model of xenograft, cryopreserved skin was less rejectable than fresh skin. The use of cryopreserved skin does not change the potential for healing.