Influence du stade de développement de l’embryon équin sur son aptitude à la conservation par le froid

• Auteur / Autrice : Mohamad Moussa
• Direction : Jean-François Bruyas, Peter Daels
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie et agronomie
• Date : Soutenance en 2005
• Etablissement(s) : Agrocampus Rennes (2004-2008)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Embryons -- Transplantation

Cryoconservation

Embryons

Équidés

Résumé

Différentes techniques pour apprécier la viabilité des embryons ont été utilisées et adaptées à l’embryon équin : marquage des cellules mortes au DAPI, des cellules en apoptose par TUNEL, des cellules en phase S par le BrdU et transfert in vivo d’embryons appariés de 2 lots différents dans la même receveuse. Le but de ce travail était dans un premier temps, de tester différents milieux et différents modes de conditionnementpour une conservation pendant 24h à + 5°C tout en jugeant l’effet du stade de développement embryonnaire. Dans un second temps, le but était de tester la technique de vitrification OPS (Open Pulled Straw) sur les embryons équins. Les résultats montrent que les milieux de conservation prêts à l’emploi sont aussi bien efficaces pour une conservation à + 5°C, pendant 24h en Equitainer que le milieu traditionnel Ham’s F10 gazé extemporanément. Une conservation à + 5°C, dans le milieu de récolte et en bouteille de 500 ml, est possible pour une courte durée de 6 h. Quelque soit le mode et le milieu de conservation il n’ya aucune différence entre les embryons de 7 ou de 8 jours, seuls ceux ≤400 µm semblent plus fragiles. La technique de vitrification par l’OPS est aussi efficace que la technique de congélation lente pour les embryons de 6,5 jours, la moitié des embryons étant correctement conservée et l’autre moitié détruite. Les blastocystes de 7 jours frais possèdent des cellules en apoptose ; la conservation à + 5°C n’induit pas d’apoptose supplémentaire mais la nécrose de certaines cellules.

Different methods were used to evaluate in vitro and in vivo the embryo quality staining by DAPI, TUNEL, surgical transfer of paired embryos, and BdrU incorporation. Some of them were adapted for the first time to equine embryos. Aims of these studies were : 1) to test in vivo and in vitro different media for cold storage of equine embryos, different systems of transport and the influence of age and stage of development of embryos on their ability to be cold stored, 2) to evaluate the viability and the incidence of DNA fragmentation in D7 embryos after storage in different media at + 5°C, 3) to adapt the BrdU incorporation assay to equine embryos and to comparate the efficiency of cryopreservation for equine embryos using the slow-cooling and OPS (Open Pulled Straw) vitrification procedure. Main data of these were ; Emcare Holding Solution and ViGro Holding Plus offer a good alternative to Ham’s F10 for 24h cold storage of equine embryos. Cold-storage increases cell death by necrosis but does not induce apoptosis. Embryos stored in 500 ml of Emcare Flushing Solution at + 5°C for 6h had a better quality than after the traditional 24h-storage in an Equitainer. Index of cell proliferation, evaluated by an incubation in BrdU during one hour, is higher (74%) in equine D6. 5 embryos than in caprine embryos (38%). Vitrification using OPS system appears to be as effective as the slow cooling method. A significant correlation between the diameter of embryos recovered at 6. 5, 7 and 8 days and the total number of cells was established.