Application de la cytométrie de flux aux cellules du système nerveux central et recherche de nouveaux marqueurs pour les cellules souches neurales

Application of flow cytometry to central nervous system cells and identification for new markers for neural stem cells

• Auteur / Autrice : Solène Sergent-Tanguy
• Direction : Philippe Brachet, Philippe Naveilhan
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Médecine. Neurosciences
• Date : Soutenance en 2005
• Etablissement(s) : Nantes
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale chimie biologie (Nantes....-2008)
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Nantes Université. Pôle SantéUFR Médecine et Techniques Médicales (Nantes)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cytométrie de flux

Différenciation cellulaire

Cellules souches

Résumé

Les cellules souches neurales (CSN), cellules multipotentes ayant conservé une forte capacité proliférative, ouvrent de nouvelles perspectives dans le traitement des maladies neurodégénératives. Toutefois, leur meilleure caractérisation et la maîtrise de leur différenciation restent des problèmes fondamentaux. Cette thèse a eu pour objectif la recherche de marqueurs extracellulaires spécifiques des CSN permettant leur purification. Le premier point a été d'adapter l'analyse phénotypique par cytome����trie de flux aux cellules du système nerveux central (SNC) puis de contrôler la fiabilité de marqueurs comme la nestine utilisée pour définir les CSN. Nous avons ensuite analysé l'expression de différents marqueurs type CD (cluster of differenciation) par les cellules présentes dans des cultures de CSN, d'astrocytes et de neurones. Nous avons montré que quelques marqueurs étaient majoritairement exprimés par ces cellules et qu'une sélection négative par CD3 permettrait un enrichissement en CSN.

Neural stem cells (NSC) are of great interest for restorative strategies in neurodegenerative diseases because of their capacity to proliferate and to give rise to all of the major cell types of the central nervous system (CNS). However, major improvements in the characterisation and control of the differentiation of NSC are necessary. Our objectives were to search for specific extracellular markers of NSC in order to be able to identify and to sort them from amongst other cell types. First we investigated the possibility of using flow cytometry to characterise CNS-derived cells and then to control the specificity of markers such as nestin used to define NSC. Next, we evaluated the expression of a number of CD molecules (cluster of differentiation) by cells present in cultures of NSC, astrocytes and neurons. The results showed that some markers are differentially expressed by these cells and that a negative selection by CD3 would enable enrichment of NSC.