Élaboration de particules cationiques biodégradables comme vecteurs d'acides nucléiques

• Auteur / Autrice : Isabelle Messai
• Direction : Thierry Delair
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie des matériaux
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Lyon 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Chitosane

Polyélectrolytes

Colloïdes

Vecteurs de médicaments

Absorption et adsorption

ADN

Nanoparticules

Résumé

L'objectif de ce travail a été d'étudier l'élaboration et la caractérisation des particules cationiques à partir de polymères préformés, et l'adsorption d'ADN plasmidique sur ces supports, en vue d'une application vaccinale. Deux stratégies ont été envisagées pour réaliser ces structures. Dans une première approche, nous avons préparé des colloi͏̈des en deux étapes successives suivant le procédé "Layer-by-Layer". Après la synthèse de particules nues de PLA, par Émulsification-diffusion ou par dialyse, leur fonctionnalisation a été optimisée par des polymères cationiques de manière à obtenir des colloi͏̈des stables pouvant complexer efficacement de l'ADN plasmidique. Les polycations utilisés dans le cadre de cette étude ont été le poly(éthylèneimine), le pDMAEMA puis le chitosane. La seconde approche a consisté à élaborer des colloi͏̈des cationiques en une seule étape, en introduisant directement dans la formulation initiale, le polyelectrolyte cationique permettant la fonctionnalisation de surface nécessaire à l'adsorption de plasmide. La présence du polyelectrolyte à l'interface a été démontrée par des mesures de mobilité électrophorétique, des clichés de microscopie à balayage ou à transmission et par dosage des fonctions amines en utilisant la Fluorescamine, l'Orange IIC ou la méthode de Bradford suivant le polycation analysé. Enfin, l'adsorption de plasmide a été effectuée sur ces systèmes particulaires fonctionnels et visualisée sur des gels d'agarose. Le processus de fixation de l'ADN dépend de la nature des interfaces (nombres de charge, accessibilité) mais aussi du type d'interaction existant entre le gène thérapeutique et le support colloi͏̈dal (interactions électrostatiques ou hydrophobes, liaisons hydrogène). Les colloi͏̈des obtenus ont été utilisés dans la vectorisation "in vivo" d'antigènes