Caractérisation biochimique et moléculaire d'un anticorps catalytique anti-idiotypique à activité bêta-lactamase

by Séverine Padiolleau-Lefèvre

Doctoral thesis in Stratégies d'exploitation des fonctions biologiques

Under the supervision of Alain Friboulet.

defended on 2004

in Compiègne .

  • Alternative Title

    Biochemical and molecular characterization of an anti-idiotypic catalytic antibody displaying a beta-lactamase like activity


  • Abstract

    A monoclonal catalytic antibody displaying a B-Iactamase like activity was generated by the idiotypic pathway. The aim of this study is to understand the catalytic mechanism. Kinetic parameters were measured using ampicillin as substrate, indicating a KM of 4. 3 mM and a kcat of 2, 1 mn-l. A suicide-like mechanism and the implication of an acidic residue in the active site of the abzyme were demonstrated. Finally, the catalytic residues were localized on the antibody light chain. The molecular modelling of the light chain suggests that the active site of the abzyme is a result of a structural information transfer from the model enzyme. The scFv fragment was also produced and the kinetic parameters measured were comparable to those of the entire antibody, with KM = 16,8 mM and kcat = 3,5 mn-l. The sequence homology between the abzyme and other antibodies found in autoimmune diseases led us to suppose a possible role of abzymes in metabolism.


  • Abstract

    Un anticorps catalytique monoclonal à activité B-Iactamase a été généré par exploitation du réseau idiotypique. L'objectif de cette étude est de caractériser le mécanisme réactionnel mis en jeu lors de la catalyse par l'abzyme. Les paramètres cinétiques ont été déterminés sur l'ampicilline, montrant un KM de 4,3 mM et un kcat de 2,1 mn-l. Un mécanisme de type suicide et l'implication d'un résidu acide dans le site actif de l'anticorps ont été démontrés. Enfin, nous avons localisé les résidus essentiels à la catalyse au niveau de la chaîne légère. La modélisation de celle-ci suggère que le site actif de l'abzyme résulte d'un transfert d'information au niveau structural. Le fragment scFv a été produit et les paramètres cinétiques mesurés sont comparables à ceux de l'abzyme : KM = 16,8mM,kcat=3,5mn-I. L'homologie de séquence de l'abzyme avec d'autres anticorps impliqués dans des maladies autoimmunes, soulève la question du rôle des anticorps catalytiques dans le métabolisme.

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Informations

  • Details : 109-XXXIII p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 210 réf.

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  • Library : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Available for PEB
  • Odds : 2004 LEF 1515
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