Mise en oeuvre d'anticorps catalytiques à activité estérase en milieux hétérogènes et non-conventionnels

Study of catalytic antibodies with esterase activity in heterogeneous and nonconventional media

• Auteur / Autrice : Eric Franqueville
• Direction : Alain Friboulet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie
• Date : Soutenance en 2003
• Etablissement(s) : Compiègne

Mots clés

Mots clés contrôlés

Anticorps catalytiques

Octanes

Micelles inverses

Catalyse hétérogène

Mots clés libres

Milieux non-conventionnels

Surfactant AOT

Abzyme

Résumé

Nous avons étudié l'immobilisation et la solubilisation en milieu micellaire, d'anticorps catalytiques à activité estérase. Une IgM monoclonale et une préparation polyclonale d'IgG ont été utilisées comme abzymes modèles dans le cadre de ce travail. L'immobilisation de l'IgM avec des rendements d'immobilisation élevés a été effectuée par coréticulation avec l'albumine et par couplage avec des billes de polymétacrylate. Le support constitué par les billes permet la meilleure rétention de l'activité catalytique de l'IgM. Un phénomène de partition de substrat modifiant l'activité catalytique apparente à faible concentration en substrat, a été mis en évidence dans le cas de l'utilisation du support d'albumine. Une étude de la stabilité de l'IgM immobilisée indique que le support constitué des billes de polymétacrylate pourrait être utilisé dans un milieu organique constitué d'isooctane. L'IgM qui a été solubilisée avec succès dans un milieu micellaire inverse composé du surfactant AOT et du solvant isooctane, conserve son activité hydrolytique sans modification de la constante catalytique kcat, par rapport à celle déterminée en milieu aqueux. L'activité maximale de l'abzyme a été mesurée à un rapport molaire "eau / surfactant" (wo) similaire à celui observé pour différentes enzymes hydrolytiques de faible poids moléculaire. Ces conditions ne permettant pas l'inclusion de l'IgM dans une seule micelle sans la modifier, nous avons utilisé les techniques spectroscopiques de Résonance Magnétique Nucléaire et de Corrélation de Photons pour élucider le mécanisme de solubilisation de l'IgM. Les résultats indiquent que l'IgG et l'IgM pourraient être solubilisées dans le milieu micellaire AOT/isooctane par l'intermédiaire de plusieurs micelles. La mise en œuvre d'anticorps catalytiques en milieux hétérogènes et/ou non conventionnels pourrait permettre de diversifier leur utilisation et favoriser le développement de nouvelles applications.