Biosynthese et fonction d'une proteine aaa (cafp) au cours du developpement precoce du fruit de poivron (capsicum annuum)

• Auteur / Autrice : SALIMA AKRIM
• Direction : RODOLPHE SCHANTZ
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

Une approche specifique d'amplification par rt-pcr basee sur les caracteristiques structurales des proteines aaa (atpases associees a diverses activites cellulaires) suivie d'un criblage differentiel d'une banque d'adnc de poivron correspondant au stade tres jeune fruit a permis d'isoler l'adnc cafp (capsicum annuum fusion protein), homologue a cdc48 de levure. Le gene cafp est unique et sa region codante comporte 7 exons separes par 6 introns. L'analyse d'un fragment promoteur d'environ 900 pb montre qu'il contient des cis-elements potentiels. Dans le fruit, les transcrits cafp s'accumulent preferentiellement au moment de la fecondation de la fleur et au stade vert mature, alors que la proteine est detectee majoritairement a un stade caracterise par de nombreuses divisions cellulaires. Il existe donc des mecanismes post-transcriptionnels de regulation de l'expression du gene cafp. Pour etudier plus precisement le role de la proteine au cours de la division, l'adnc homologue a cafp a ete isole chez le tabac et code pour ntfp (nicotiana tabacum fusion protein). Dans une culture de by2 asynchrone, l'accumulation des transcrits ntfp et de la proteine est stimulee dans des phases de division et d'expansion cellulaires. D'autre part, ntfp se trouve preferentiellement dans le noyau et dans la fraction microsomale avant la phase exponentielle de croissance des cellules et dans le cytoplasme pendant la phase stationnaire. Ces resultats suggerent qu'elle pourrait intervenir dans des fonctions biologiques differentes. Au cours du cycle cellulaire, deux pics d'accumulation transitoires de ntfp ont ete detectes : l'un avant la mitose, en phase g2, et l'autre apres la mitose, en phase g1 et/ou s. La localisation de la proteine a ete determinee par immunodetection et par expression de la proteine de fusion cafp-gfp. Ainsi nos resultats montrent que ntfp semble etre impliquee dans la fusion de membranes homotypiques au niveau de la plaque cellulaire.