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des thèses françaises
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Organisation structurale et fonctionnelle d'un cotransporteur sodium/sucre bactérien, la Melibiose Perméase d' Escherichia coli
| Auteur / Autrice : | Emmanuelle Cordat |
| Direction : | Gérard Leblanc |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Sciences de la vie |
| Date : | Soutenance en 2000 |
| Etablissement(s) : | Nice |
| Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Laboratoire Jean Maetz (Villefranche-sur-Mer, Alpes-Maritimes) |
Mots clés
Résumé
La mélibiose perméase (MelB) d'Escherichia coli est responsable de l'accumulation d'α-galactosides (mélibiose) ou de certains ß-galactosides (TMG ou méthyl-1-thio-ß -D-galactopyranoside) couplée au transport d'ions sodium, lithium ou protons. C'est une protéine modèle de la famille des cotransporteurs sodium-solutés. Le but de ce travail a été d'acquérir des informations concernant l'organisation structurale et fonctionnelle, ainsi que sur la localisation des sites de fixation et de transport des substrats de MelB. Dans ce but, j'ai utilisé les propriétés de fluorescence intrinsèque et de sondes extrinsèques sur ce transporteur. Dans une première partie, je me suis intéressée à l'organisation fonctionnelle de MelB par fluorescence intrinsèque. J'ai réalisé la mutagenèse dirigée de chacun des six tryptophanes de la moitié N-terminale de MelB en phénylalanine (. . . ) Les résultats m'ont amenée à proposer que le DTM IV et la boucle cytoplasmique 4-5 pourraient jouer un rôle de charnière entre site cationique et site de fixation des sucres. La deuxième partie a consisté à identifier les tryptophanes N- et/ou C-terminaux impliqués dans un phénomène de Transfert d'énergie de fluorescence (FRET) entre les tryptophanes et une sonde fluorescente substrat de MelB (. . . ). Enfin, dans une troisième partie, j'ai caractérisé trois anticorps monoclonaux murins dirigés contre MelB. Ces anticorps ont été préparés dans le but d'approfondir nos connaissances sur la topologie du transporteur et de les co-cristalliser avec MelB.