Clonage, caracterisation biochimique et approche des roles physiologiques des hydroxylases d'acides gras chez la vesce (vicia sativa) et le tabac (nicotiana tabacum)

• Auteur / Autrice : RENAUD LE BOUQUIN
• Direction : Irène Benveniste
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

Les hydroxylases d'acides gras, qui ont fait l'objet de notre etude, font partie de la super-famille des monooxygenases a cytochrome p450 (p450). Cette categorie particuliere de p450 catalyse l'introduction d'une fonction alcool sur les carbones terminaux ou sub-terminaux des acides gras. Chez les plantes, ces acides gras hydroxyles sont impliques dans differentes fonctions physiologiques importantes. En effet, ce sont les constituants majeurs des cuticules, premiere barriere physique, qui protege les plantes du milieu exterieur. Plus recemment, il a ete montre que ces acides gras hydroxyles participent aux mecanismes de defense en tant qu'inducteurs primaires ou messagers secondaires. Jusqu'a present, les etudes portant sur ces enzymes etaient realisees sur des fractions microsomiques ne permettant pas la determination du nombre d'isoformes presentes dans la preparation, ni leur caracterisation individuelle. L'isolement, chez la vesce (vicia sativa) et le tabac (nicotiana tabacum), de cinq adnc complets et deux partiels codant pour sept p450 differents appartenant a la sous-famille cyp94a, nous permet d'affirmer que les plantes possedent effectivement differentes isoformes d'hydroxylases d'acides gras. L'expression fonctionnelle de ces enzymes dans un systeme heterologue approprie, nous a permis d'etudier leurs activites catalytiques. Nous avons ainsi montre que ces hydroxylases possedent des specificites de substrat et des regiospecificites d'hydroxylation propres determinees par la longueur et le degre d'oxydation des acides gras. Ces resultats, combines avec les etudes portant sur la regulation transcriptionnelle des differents arn messagers, suggerent que certaines hydroxylases clonees peuvent intervenir dans la biosynthese des monomeres de cutine et/ou dans les mecanismes de defense contre les pathogenes. Enfin, la realisation de lignees transgeniques de tabac nous permettront d'analyser in planta, les effets d'une expression plus ou moins forte des hydroxylases d'acides gras.