Analyses des relations structure-fonction et des mecanismes de regulation du recepteur b 2 humain de la bradykinine

• Auteur / Autrice : ANNE PIZARD
• Direction : Rabary M. Rajerison
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La bradykinine (bk) exerce une action vasodilatatrice puissante, dependante de l'endothelium, via le recepteur a sept domaines transmembranaires couple aux proteines g de type b 2. L'activation de ce dernier par la bk est soumise a desensibilisation. Nous avons etudie les mecanismes moleculaires responsables de cette desensibilisation et de facon plus generale les modifications structurales et fonctionnelles du recepteur dues a la fixation des ligands. Le travail a consiste en la caracterisation pharmacologique et fonctionnelle du recepteur b 2 humain recombinant exprime dans des cellules cho. Ceci a permis la mise en evidence d'un phenomene particulier de desensibilisation dit de cooperativite negative dans la liaison des ligands sur le recepteur. Ce phenomene est fonction de la quantite de ligand mais ne necessite pas le couplage du recepteur car il s'observe avec des agonistes et antagonistes. Il resulte probablement d'une interaction entre les molecules de recepteur et contribuerait a limiter l'action de la bk. Nous avons aussi etudie les modifications structurales du recepteur induites par l'agoniste. L'utilisation de la mutagenese dirigee a permis de tester l'implication de motifs candidats dans les phenomenes de phosphorylation, d'internalisation, en particulier celle d'une sequence hautement conservee entre les especes riche en ser et thr situee dans la queue c-terminale. Des mutants de troncation, deletion et de mutation ponctuelle exprimes dans trois types cellulaires, ont permis d'identifier trois ser et deux thr de cette sequence comme etant les sites majeurs de phosphorylation. L'internalisation est liee a la phosphorylation de ces sites mais par contre la voie d'activation des map kinases est independante de ces deux mecanismes. L'etude de la palmitoylation a permis de montrer que le recepteur etait palmitoyle sur deux residus cysteines qui jouent un role inattendu dans la regulation du couplage en modifiant la sensibilite de la cellule a au moins un antagoniste qui devient agoniste sur le recepteur depalmitoyle par mutagenese dirigee. L'ensemble de ces observations montrent la complexite des mecanismes moleculaires et cellulaires impliques dans la regulation de l'activation des cellules par la bk et la terminaison de cette activite.