Organisation du polymorphisme moléculaire des séquences intergéniques transcrites (ITS) des unités ribosomiques de Scutellospora Castanea (glomales, zygomycetes)

Organisation of the molecular polymorphism of the internal transcribed spacer (ITS) of the ribosomal units in Scutellospora Castanea (glomales, zygomycetes)

• Auteur / Autrice : Mohamed Hijri
• Direction : Hubert Dulieu
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie, biologie cellulaire et appliquée
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Dijon

Mots clés

Mots clés contrôlés

Zygomycètes

Endomycorhizes à vésicules et arbuscules

Hybridation in situ en fluorescence

Spores fongiques

Marqueurs génétiques

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats

Polymorphismes de longueur des fragments de restriction

PCR (génétique)

ADN ribosomique

Phycomycètes

Résumé

Le polymorphisme des espaceurs transcrits (ITS) des unités ribosomiques chez Scutellospora Castanea (glomales, zygomycetes), a ete évalué. L'amplification PCR avec des amorces universelles ITS1/ITS4 à partir d'un ADN multi ou monosporal a montré plusieurs fragments de tailles variables. Les produits PCR sont clonés, et leur analyse par PCR-RFLP a permis de les regrouper en 6 types d'ITS. Cinq oligonucléotides spécifiques ont été définis en vue d'être utilisés en PCR spécifique de chaque type d'ITS. Des spores individuelles ont été analysées par PCR spécifique de chaque type. Une variabilité de présence/absence des types d'ITS, a été observée entre les spores et à l'intérieur de celles-ci. Par ailleurs, une ségrégation des variants de longueur d'ITS a été montrée par amplification PCR à partir de fractions nucléaires d'une seule spore. Ces résultats montrent que les spores sont hétérocaryotiques. L'organisation nucléaire des types d'ITS a été étudiée par hybridation in situ fluorescente. Une variabilité du nombre des loci et des fréquences des types a été détectée entre les noyaux d'une spore. Le nombre de loci est de 10 pour les fréquents types (t13 et t2), mais fortement réduit et variable de 0 a 3 loci pour les autres. La co-localisation de deux types fréquents a montré une hétérogénéité entre les noyaux d'une spore. Ce type d'expérience a montré une hétérogénéité des loci ribosomiques dans un même noyau, avec un type fréquent et un rare. L'étude d'une population de spores, obtenue par inoculation monosporale, a montré que chaque type d'ITS peut être perdu lors de la sporulation par effet de dérive. Ces résultats suggèrent : 1) que des échanges de noyaux semblent indispensables entre les hyphes via des anastomoses pour maintenir le polymorphisme, et 2) qu'une faible fréquence de recombinaison pourrait également avoir eu lieu entre les noyaux.