La spectrometrie de masse maldi-tof comme nouvelle approche methodologique pour l'etude de la reponse immunitaire des insectes

Maldi-tof mass spectrometry as a novel approach to study insect immunity

• Auteur / Autrice : SANDRINE UTTENWEILER JOSEPH
• Direction : Philippe Bulet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

La reponse immunitaire des insectes fait intervenir des processus cellulaires et humoraux. L'aspect le mieux connu est l'activation, suite a une infection microbienne, de la synthese de peptides antibiotiques qui sont relargues dans le sang. Dans le but de rechercher de nouvelles molecules de la reponse immunitaire de la drosophile, modele choisi pour ses capacites d'outil de biologie moleculaire, j'ai entrepris une etude differentielle du contenu sanguin d'une drosophile par spectrometrie de masse (sm) maldi-tof. Les conditions d'analyses par sm maldi-tof de melanges complexes ont ete definies au cours de l'etude sur la diptericine, peptide antibacterien o-glycosyle de phormia terranovae. Pour determiner l'origine de sa glycoheterogeneite, l'abondance relative des differentes glycoformes a ete detectee par sm maldi-tof dans les fractions issues de chaque etape de purification. Cette analyse a montre que les conditions de purification n'affectent pas la structure de la diptericine et que la glycoheterogeneite a une origine naturelle. Au cours des analyses sur le sang et le corps gras, l'approche differentielle entre des larves controles et immunisees a permis de detecter des molecules induites au cours de la reponse immunitaire de p. Terranovae. Cette approche a ete appliquee a la drosophile. L'analyse differentielle par sm maldi-tof du sang d'une drosophile controle et immunisee a permis de detecter 24 molecules (dim pour drosophila immune-induced molecule) induites apres infection. Ces dims sont des peptides et quatre d'entre elles correspondent a des peptides antimicrobiens, les 20 autres constituant de nouvelles molecules. Cette methodologie a permis d'etudier le metabolisme des dims ainsi que leur induction chez differents mutants de la reponse immunitaire. Une methodologie combinant la sm maldi-tof, l'hplc et le sequencage peptidique a permis de caracteriser structurellement trois dims. Le clonage d'une dim a montre son inductibilite suite a une infection.