Mécanismes de dégradation de l'uracile permease, une protéine de la membrane plasmique de la levure saccharomyces cerevisiae

• Auteur / Autrice : Jean-Marc Galan
• Direction : Rosine Haguenauer-Tsapis
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Ce travail porte sur les mécanismes de protéolyse des protéines de membrane plasmique chez la levure saccharomyces cerevisiae. Il utilise comme protéine modèle l'uracile perméase codée par le gène fur4. Cette protéine polytopique suit la voie de sécrétion. Sa dégradation consécutive à son endocytose se produit dans la vacuole. Nous avons démontre que fur4p est ubiquitylée de façon dépendante de l'ubiquitine-ligase NPI1P. L'ubiquitylation est principalement connue pour provoquer la protéolyse sélective de protéines solubles par le proteasome. Cependant, aucune stabilisation de fur4p dans des mutants déficients pour cette multi-protéase n'a pu être détectée. En revanche, dans un mutant affecte pour NPI1P, fur4p n'est plus ubiquitylée et est stabilisée à la membrane plasmique. Enfin, dans des cellules affectées pour l'étape d'internalisation de l'endocytose fur4p s'accumule à la membrane plasmique sous forme conjuguée à l'ubiquitine. Ces résultats indiquent que la perméase est ubiquitylée à la membrane plasmique et que cette modification est requise pour son internalisation. Des résultats analogues ont été rapportés pour plusieurs récepteurs et transporteurs chez la levure et les mammifères. L'ubiquitylation semble donc assez généralement utilisée dans les cellules eucaryotes comme signal d'endocytose. Cette nouvelle fonction de l'ubiquitylation souleve de nombreuses questions. Nous nous sommes notamment demandés pourquoi fur4p n'est pas reconnue par le protéasome. Nous avons démontre que fur4p et une autre perméase de membrane plasmique portent un type d'ubiquitylation différent de celui porte par les substrats du protéasome. Enfin, nous avons étudié les mécanismes de protéolyse d'une forme mutante de fur4p qui n'atteint pas.