Degradation et fonction de cln1 identification de sequences en cis responsables de la degradation et de la fonction de cln1, une cycline g1 de saccharomyces cerevisiae

• Auteur / Autrice : SOPHIE GARSUAULT
• Direction : Carl Mann
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Ces travaux ont consiste a identifier des signaux en cis necessaires a la degradation et a la fonction de cln1, une cycline g1 de s. Cerevisiae. Les cyclines g1 sont au coeur de la regulation du cycle cellulaire eucaryote, controlant la transition entre proliferation et differenciation. Chez la levure saccharomyces cerevisiae, cln1 et cln2 s'accumulent dans la cellule en phase g1, declenchent l'engagement irreversible dans un nouveau cycle en activant la kinase cdc28, puis disparaissent brutalement en raison de leur haute instabilite. L'association a cdc28 se fait par l'intermediaire d'une region tres conservee chez toutes les cyclines, la cyclin-box, situee dans la region n-terminale, et correspondant au premier domaine de repliement defini par cristallographie (cyclin-fold). Nous montrons que la derniere helice du second cyclin-fold joue un role determinant dans la fonction de cln1. Peu d'exemples de sequences situees hors de la cyclin-box et contribuant a la fonctionnalite de la cycline ont ete rapportes jusqu'a maintenant. Des deletions carboxy-terminales progressives ont permis de montrer que les determinants de la degradation sont repartis dans la region c-terminale de cln1, et sont similaires a ceux identifies chez cln2 et cln3. Les sites de phosphorylation semblent etre les determinants majeurs, mais la region c-terminale contient d'autres signaux non identifies, necessaires pour une degradation rapide. Les determinants de proteolyse contenus dans la region carboxy-terminale de cln1 ne fonctionnent pas comme des signaux autonomes de degradation, contrairement a ce qui a ete observe chez cln2 et cln3. La mutation ponctuelle dans la cyclin-box d'un residu hautement conserve, l'arginine 72, est suffisante pour abolir la fixation a cdc28, et a stabiliser significativement la cycline. Ainsi, la fixation de la cycline a la kinase est un pre-requis a sa degradation rapide. Nous montrons par ailleurs que les cyclines libres - non fixees a cdc28 - sont reconnues par une voie de degradation operant plus lentement, ne reconnaissant probablement pas les memes signaux que la voie de degradation des cyclines associees a cdc28.