Relation entre la toxicite, le repliement et l'exportation de proteines produits dans le periplasme de escherichia coli : analyse physiologique et genetique a l'aide de proteines hybrides dsba'-phoa

• Auteur / Autrice : AGNES GUIGUENO
• Direction : PAUL-LOUIS BOQUET
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon

Résumé

La production massive de proteines dans le periplasme de escherichia coli provoque souvent des dysfonctionnements pouvant conduire a la mort cellulaire. Nous les avons analyses a l'aide de proteines hybrides modeles dsba'-phoa, obtenues par insertion du transposon tnphoa dans le gene dsba qui specifie la proteine disulfure oxydase dsba. Les proteines hybrides sont distinctes par la taille du fragment amino-terminal dsba'. Nous montrons que la region gln146-pro163 de dsba est indispensable pour le repliement de dsba et son activite. Les proteines hybrides contenant cette region (classe i) sont stables dans le periplasme contrairement a celles qui en sont depourvues (classe ii). Ces dernieres s'exportent moins bien que les proteines de classe i et inhibent particulierement le processus general d'exportation. A niveau moyen d'expression, elles ont un effet letal dans des bacteries depourvues de la protease periplasmique degp. En degradant le fragment dsba' non structure, degp protege les bacteries. La toxicite des proteines de classe ii dans une souche degp#- peut etre supprimee par des mutations chromosomiques qui reduisent toutes la synthese proteique generale. Certaines d'entre elles ameliorent l'exportation des proteines hybrides. La recherche de genes suppresseurs en copies multiples a permis d'identifier hptr, qui specifie un nouvel arn non traduit de 92 nucleotides. Sa surexpression reduit la quantite de proteine hybride bloquee dans la membrane et ameliore l'exportation d'autres proteines periplasmiques. L'arn hptr pourrait avoir une fonction regulatrice d'un type nouveau.